中国病原生物学杂志
中國病原生物學雜誌
중국병원생물학잡지
JOURNAL OF PATHOGEN BIOLOGY
2008年
5期
321-325,329
,共6页
陈婉南%郭丹华%陈金烟%林万松%林建银%林旭
陳婉南%郭丹華%陳金煙%林萬鬆%林建銀%林旭
진완남%곽단화%진금연%림만송%림건은%림욱
肝炎病毒,乙型%RNA剪接%人类基因表达谱芯片
肝炎病毒,乙型%RNA剪接%人類基因錶達譜芯片
간염병독,을형%RNA전접%인류기인표체보심편
目的 研究单剪接及双剪接型2.2 kb乙型肝炎病毒基因编码剪接特异性蛋白(分别为TPss及TPds)对Huh7细胞基因表达的影响,探讨其可能的致病机制.方法 PCR扩增TPss及TPds编码序列并克隆入pcDNA3.1/HisC.采用FuGENE6将重组表达载体及相应空载体分别瞬时转染Huh7细胞,Trizol抽提细胞总蛋白与总RNA.以Western blot检测目的蛋白的表达,通过Affymetrix Genechip U133 plus 2.0人类基因表达谱芯片检测Huh7肝细胞基因转录的变化并以半定量RT-PCR进一步验证. 结果 成功构建重组真核表达载体pcDNA3.1/HisC-TPss及pcDNA3.1/HisC-TPds,在Huh7细胞中能分别表达TPss(单剪接)及TPds(双剪接)蛋白.TPss蛋白导致Huh7细胞DGKβ(diacylglycerol kinase beta )等4个基因转录上调,ZNF652( zinc finger protein 652)等5个基因转录下降;TPds蛋白导致细胞MTSS1( Metastasis suppressor 1)等3个基因转录上调,WARS2基因(Tryptophanyl tRNA synthetase 2)转录下降. 结论 2.2 kb乙型肝炎病毒基因组剪接体编码剪接特异性蛋白可能影响肝细胞骨架的重塑、细胞内物质代谢等方面,与肝细胞的增生、迁移及代谢异常密切相关.
目的 研究單剪接及雙剪接型2.2 kb乙型肝炎病毒基因編碼剪接特異性蛋白(分彆為TPss及TPds)對Huh7細胞基因錶達的影響,探討其可能的緻病機製.方法 PCR擴增TPss及TPds編碼序列併剋隆入pcDNA3.1/HisC.採用FuGENE6將重組錶達載體及相應空載體分彆瞬時轉染Huh7細胞,Trizol抽提細胞總蛋白與總RNA.以Western blot檢測目的蛋白的錶達,通過Affymetrix Genechip U133 plus 2.0人類基因錶達譜芯片檢測Huh7肝細胞基因轉錄的變化併以半定量RT-PCR進一步驗證. 結果 成功構建重組真覈錶達載體pcDNA3.1/HisC-TPss及pcDNA3.1/HisC-TPds,在Huh7細胞中能分彆錶達TPss(單剪接)及TPds(雙剪接)蛋白.TPss蛋白導緻Huh7細胞DGKβ(diacylglycerol kinase beta )等4箇基因轉錄上調,ZNF652( zinc finger protein 652)等5箇基因轉錄下降;TPds蛋白導緻細胞MTSS1( Metastasis suppressor 1)等3箇基因轉錄上調,WARS2基因(Tryptophanyl tRNA synthetase 2)轉錄下降. 結論 2.2 kb乙型肝炎病毒基因組剪接體編碼剪接特異性蛋白可能影響肝細胞骨架的重塑、細胞內物質代謝等方麵,與肝細胞的增生、遷移及代謝異常密切相關.
목적 연구단전접급쌍전접형2.2 kb을형간염병독기인편마전접특이성단백(분별위TPss급TPds)대Huh7세포기인표체적영향,탐토기가능적치병궤제.방법 PCR확증TPss급TPds편마서렬병극륭입pcDNA3.1/HisC.채용FuGENE6장중조표체재체급상응공재체분별순시전염Huh7세포,Trizol추제세포총단백여총RNA.이Western blot검측목적단백적표체,통과Affymetrix Genechip U133 plus 2.0인류기인표체보심편검측Huh7간세포기인전록적변화병이반정량RT-PCR진일보험증. 결과 성공구건중조진핵표체재체pcDNA3.1/HisC-TPss급pcDNA3.1/HisC-TPds,재Huh7세포중능분별표체TPss(단전접)급TPds(쌍전접)단백.TPss단백도치Huh7세포DGKβ(diacylglycerol kinase beta )등4개기인전록상조,ZNF652( zinc finger protein 652)등5개기인전록하강;TPds단백도치세포MTSS1( Metastasis suppressor 1)등3개기인전록상조,WARS2기인(Tryptophanyl tRNA synthetase 2)전록하강. 결론 2.2 kb을형간염병독기인조전접체편마전접특이성단백가능영향간세포골가적중소、세포내물질대사등방면,여간세포적증생、천이급대사이상밀절상관.
