中国兽医科学
中國獸醫科學
중국수의과학
VETERINARY SCIENCE IN CHINA
2009年
1期
45-49
,共5页
鲁会军%金宁一%郑敏%韩松%霍晓伟%田明尧%李霄%金扩世
魯會軍%金寧一%鄭敏%韓鬆%霍曉偉%田明堯%李霄%金擴世
로회군%금저일%정민%한송%곽효위%전명요%리소%금확세
口蹄疫%亚洲1型%多表位基因%酶联免疫吸附试验
口蹄疫%亞洲1型%多錶位基因%酶聯免疫吸附試驗
구제역%아주1형%다표위기인%매련면역흡부시험
根据国内流行的Asia 1型口蹄疫病毒的基因组特性,合成了Asia 1型口蹄疫病毒2个流行毒株VP1基因的5个抗原表位,并将其克隆到pMDl8-T载体上,再按设计的酶切位点连接,构建出Asia 1型口蹄疫病毒VP1双拷贝基因片段(VPlAsia).然后,将VP1Asia基因连接到原核表达载体pET-28a(+)上,构建了重组表达质粒pET-28a-VPlAsia,接着将其转入BL21茵中进行原核表达.以纯化的表达蛋白作为抗原检测了牛Asia 1型口蹄疫病毒阳性血清.结果显示,VPIAsia基因在大肠杆菌中获得了高效表达,以纯化的VPIAsia蛋白作为抗原建立了检测Asia 1型口蹄疫病毒抗体的ELISA方法.以建立的ELISA方法和标准Asia 1型口蹄疫液相阻断ELISA试剂盒对30份临床样品进行了检测,两种检测方法的阳性率分别为90.0% (27/30)和93.3%(28/30),符合率为89.7%(26/29).本研究为组装Asia 1型口蹄疫病毒抗体ELISA诊断试剂盒奠定了基础.
根據國內流行的Asia 1型口蹄疫病毒的基因組特性,閤成瞭Asia 1型口蹄疫病毒2箇流行毒株VP1基因的5箇抗原錶位,併將其剋隆到pMDl8-T載體上,再按設計的酶切位點連接,構建齣Asia 1型口蹄疫病毒VP1雙拷貝基因片段(VPlAsia).然後,將VP1Asia基因連接到原覈錶達載體pET-28a(+)上,構建瞭重組錶達質粒pET-28a-VPlAsia,接著將其轉入BL21茵中進行原覈錶達.以純化的錶達蛋白作為抗原檢測瞭牛Asia 1型口蹄疫病毒暘性血清.結果顯示,VPIAsia基因在大腸桿菌中穫得瞭高效錶達,以純化的VPIAsia蛋白作為抗原建立瞭檢測Asia 1型口蹄疫病毒抗體的ELISA方法.以建立的ELISA方法和標準Asia 1型口蹄疫液相阻斷ELISA試劑盒對30份臨床樣品進行瞭檢測,兩種檢測方法的暘性率分彆為90.0% (27/30)和93.3%(28/30),符閤率為89.7%(26/29).本研究為組裝Asia 1型口蹄疫病毒抗體ELISA診斷試劑盒奠定瞭基礎.
근거국내류행적Asia 1형구제역병독적기인조특성,합성료Asia 1형구제역병독2개류행독주VP1기인적5개항원표위,병장기극륭도pMDl8-T재체상,재안설계적매절위점련접,구건출Asia 1형구제역병독VP1쌍고패기인편단(VPlAsia).연후,장VP1Asia기인련접도원핵표체재체pET-28a(+)상,구건료중조표체질립pET-28a-VPlAsia,접착장기전입BL21인중진행원핵표체.이순화적표체단백작위항원검측료우Asia 1형구제역병독양성혈청.결과현시,VPIAsia기인재대장간균중획득료고효표체,이순화적VPIAsia단백작위항원건립료검측Asia 1형구제역병독항체적ELISA방법.이건립적ELISA방법화표준Asia 1형구제역액상조단ELISA시제합대30빈림상양품진행료검측,량충검측방법적양성솔분별위90.0% (27/30)화93.3%(28/30),부합솔위89.7%(26/29).본연구위조장Asia 1형구제역병독항체ELISA진단시제합전정료기출.
