中国畜牧杂志
中國畜牧雜誌
중국축목잡지
CHINESE JOURNAL OF ANIMAL SCIENCE
2009年
23期
57-60
,共4页
张波%陈轶群%李志民%李一航%曹云鹤
張波%陳軼群%李誌民%李一航%曹雲鶴
장파%진질군%리지민%리일항%조운학
扬奇青霉%α-半乳糖苷酶%基因表达%蛋白纯化
颺奇青黴%α-半乳糖苷酶%基因錶達%蛋白純化
양기청매%α-반유당감매%기인표체%단백순화
提取扬奇青霉总RNA,反转录合成Cdna,PCR扩增α-半乳糖苷酶agll基因的编码区DNA序列,连接到原核表达载体pET28a(+)的多克隆位点,获得重组表达载体,转化大肠杆菌BL21,通过IPTG诱导获得agll基因的特异性表达.结果表明:8 mol/L尿素变性处理后的重组蛋白,经过Ni2+亲和柱纯化,SDs-PAGE检测该重组蛋白分子量约82 ku,与预测结果相符.纯化的酶蛋白依次经过6、4、2 mol/L和0 m01/L尿素梯度透析复性后,a-半乳糖苷酶酶活为0.4 U/ml.
提取颺奇青黴總RNA,反轉錄閤成Cdna,PCR擴增α-半乳糖苷酶agll基因的編碼區DNA序列,連接到原覈錶達載體pET28a(+)的多剋隆位點,穫得重組錶達載體,轉化大腸桿菌BL21,通過IPTG誘導穫得agll基因的特異性錶達.結果錶明:8 mol/L尿素變性處理後的重組蛋白,經過Ni2+親和柱純化,SDs-PAGE檢測該重組蛋白分子量約82 ku,與預測結果相符.純化的酶蛋白依次經過6、4、2 mol/L和0 m01/L尿素梯度透析複性後,a-半乳糖苷酶酶活為0.4 U/ml.
제취양기청매총RNA,반전록합성Cdna,PCR확증α-반유당감매agll기인적편마구DNA서렬,련접도원핵표체재체pET28a(+)적다극륭위점,획득중조표체재체,전화대장간균BL21,통과IPTG유도획득agll기인적특이성표체.결과표명:8 mol/L뇨소변성처리후적중조단백,경과Ni2+친화주순화,SDs-PAGE검측해중조단백분자량약82 ku,여예측결과상부.순화적매단백의차경과6、4、2 mol/L화0 m01/L뇨소제도투석복성후,a-반유당감매매활위0.4 U/ml.
