生物学杂志
生物學雜誌
생물학잡지
JOURNAL OF BIOLOGY
2012年
1期
16-20
,共5页
周小海%王春燕%刘宇%胡乃月%赵立青
週小海%王春燕%劉宇%鬍迺月%趙立青
주소해%왕춘연%류우%호내월%조립청
神经元蛋白3.1%酵母双杂交%重组诱饵载体%cDNA文库
神經元蛋白3.1%酵母雙雜交%重組誘餌載體%cDNA文庫
신경원단백3.1%효모쌍잡교%중조유이재체%cDNA문고
神经元蛋白3.1(P311)是肺泡发育的上游调节因子.以pEGFP-P311重组质粒为模板,利用PCR方法扩增P311基因编码序列.通过Nde I和BamH I位点插入诱饵载体 pGBKT7,构建重组诱饵载体pGBKT7-P311.重组体转化酵母菌AH109进行自激活和毒性检测,结果DNA-BD-P311融合蛋白无单独激活报告基因作用,对酵母菌亦无毒性.以出生11 d小鼠肺组织为材料,提取总RNA.逆转录产生单链cDNA,通过长距离PCR进行扩增.扩增产物ds cDNA电泳后可见大小为0.2～3.0 kb间的弥散状分布条带,说明文库cDNA可满足筛选要求.诱饵载体pGBKT7-P311的构建及相应小鼠肺组织cDNA文库的建立,为进一步利用酵母双杂交技术探讨P311功能奠定了基础.
神經元蛋白3.1(P311)是肺泡髮育的上遊調節因子.以pEGFP-P311重組質粒為模闆,利用PCR方法擴增P311基因編碼序列.通過Nde I和BamH I位點插入誘餌載體 pGBKT7,構建重組誘餌載體pGBKT7-P311.重組體轉化酵母菌AH109進行自激活和毒性檢測,結果DNA-BD-P311融閤蛋白無單獨激活報告基因作用,對酵母菌亦無毒性.以齣生11 d小鼠肺組織為材料,提取總RNA.逆轉錄產生單鏈cDNA,通過長距離PCR進行擴增.擴增產物ds cDNA電泳後可見大小為0.2～3.0 kb間的瀰散狀分佈條帶,說明文庫cDNA可滿足篩選要求.誘餌載體pGBKT7-P311的構建及相應小鼠肺組織cDNA文庫的建立,為進一步利用酵母雙雜交技術探討P311功能奠定瞭基礎.
신경원단백3.1(P311)시폐포발육적상유조절인자.이pEGFP-P311중조질립위모판,이용PCR방법확증P311기인편마서렬.통과Nde I화BamH I위점삽입유이재체 pGBKT7,구건중조유이재체pGBKT7-P311.중조체전화효모균AH109진행자격활화독성검측,결과DNA-BD-P311융합단백무단독격활보고기인작용,대효모균역무독성.이출생11 d소서폐조직위재료,제취총RNA.역전록산생단련cDNA,통과장거리PCR진행확증.확증산물ds cDNA전영후가견대소위0.2～3.0 kb간적미산상분포조대,설명문고cDNA가만족사선요구.유이재체pGBKT7-P311적구건급상응소서폐조직cDNA문고적건립,위진일보이용효모쌍잡교기술탐토P311공능전정료기출.
