中国医学科学院学报
中國醫學科學院學報
중국의학과학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE SINICAE
2011年
5期
560-565
,共6页
李金红%刘迎九%张国娟%尹洪超%陶建瓴%李航
李金紅%劉迎九%張國娟%尹洪超%陶建瓴%李航
리금홍%류영구%장국연%윤홍초%도건령%리항
雷帕霉素%3T3-L1前脂肪细胞%过氧化物酶体增殖物激活受体γ%瘦素%胆固醇
雷帕黴素%3T3-L1前脂肪細胞%過氧化物酶體增殖物激活受體γ%瘦素%膽固醇
뢰파매소%3T3-L1전지방세포%과양화물매체증식물격활수체γ%수소%담고순
目的 探讨雷帕霉素对前脂肪3T3-L1细胞脂质稳态、分泌功能的影响,阐明雷帕霉素引起高脂血症的可能机制.方法 体外培养前脂肪细胞3T3-L1细胞株,分成对照组、雷帕霉素50、100、200 nmol/L组.用油红O染色(定性)及高效液相色谱法(定量)检测3T3-L1细胞内胆固醇水平,酶联免疫吸附实验分析瘦素、脂联素的分泌量,实时荧光定量PCR法及Western blot法检测3T3-L1细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ) mRNA和蛋白的表达.结果 油红O染色显示雷帕霉素组脂肪细胞脂滴数量较对照组明显减少；对照组、雷帕霉素50、100、200 nmol/L组细胞内游离胆固醇含量分别为(12.89±0.16)、(9.84±0.45)、(9.39 ±0.46)和(8.61 ±0.34) mg/ml,与对照组相比,雷帕霉素能抑制3T3-L1前脂肪细胞内胆固醇的蓄积(P＜0.05).对照组、雷帕霉素50、100、200 nmol/L组瘦素分泌量分别为(19.02±0.52)、(16.98±0.01)、(15.62±0.01)和(13.84±0.66)ng/ml,与对照组相比,雷帕霉素能减少成熟后3T3-LI脂肪细胞瘦素的分泌水平(P＜0.05).雷帕霉素50、100及200 nmol/L组PPARγ mRNA表达量分别为对照组的94％、62％和47％,均显著低于对照组(P＜0.05)；PPARγ蛋白表达量分别为对照组的80％、74％和61％,均显著低于对照组(P＜0.05).雷帕霉素100 nmol/L、PPARγ阻断剂GW9662 10 μmol/L、PPARγ增敏剂曲格列酮10 μmol/L分别处理细胞96 h,检测PPARγmRNA的表达分别为对照组的(0.60±0.14)、(0.67 ±0.03)和(1.30±0.14)倍,与对照组相比,差异具有统计学意义(P＜0.05); PPARγ蛋白表达与mRNA的表达变化趋势相似,差异具有统计学意义(P＜0.05).雷帕霉素100 nmol/L、PPARγ阻断剂GW9662 10 μmol/L、PPARγ增敏剂曲格列酮10 μmol/L分别处理细胞96 h,ELISA检测各处理组瘦素表达量分别为(19.02 ±0.52)、(15.62 ±0.10)、(14.45±1.01)和(18.07 ±0.66) ng/ml,与对照组相比,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 雷帕霉素通过下调PPARγ的表达减少脂肪细胞内的脂质蓄积,并且抑制其瘦素分泌,这为临床上雷帕霉素引起的高脂血症提供了一个可能的解释.
目的 探討雷帕黴素對前脂肪3T3-L1細胞脂質穩態、分泌功能的影響,闡明雷帕黴素引起高脂血癥的可能機製.方法 體外培養前脂肪細胞3T3-L1細胞株,分成對照組、雷帕黴素50、100、200 nmol/L組.用油紅O染色(定性)及高效液相色譜法(定量)檢測3T3-L1細胞內膽固醇水平,酶聯免疫吸附實驗分析瘦素、脂聯素的分泌量,實時熒光定量PCR法及Western blot法檢測3T3-L1細胞過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ) mRNA和蛋白的錶達.結果 油紅O染色顯示雷帕黴素組脂肪細胞脂滴數量較對照組明顯減少；對照組、雷帕黴素50、100、200 nmol/L組細胞內遊離膽固醇含量分彆為(12.89±0.16)、(9.84±0.45)、(9.39 ±0.46)和(8.61 ±0.34) mg/ml,與對照組相比,雷帕黴素能抑製3T3-L1前脂肪細胞內膽固醇的蓄積(P＜0.05).對照組、雷帕黴素50、100、200 nmol/L組瘦素分泌量分彆為(19.02±0.52)、(16.98±0.01)、(15.62±0.01)和(13.84±0.66)ng/ml,與對照組相比,雷帕黴素能減少成熟後3T3-LI脂肪細胞瘦素的分泌水平(P＜0.05).雷帕黴素50、100及200 nmol/L組PPARγ mRNA錶達量分彆為對照組的94％、62％和47％,均顯著低于對照組(P＜0.05)；PPARγ蛋白錶達量分彆為對照組的80％、74％和61％,均顯著低于對照組(P＜0.05).雷帕黴素100 nmol/L、PPARγ阻斷劑GW9662 10 μmol/L、PPARγ增敏劑麯格列酮10 μmol/L分彆處理細胞96 h,檢測PPARγmRNA的錶達分彆為對照組的(0.60±0.14)、(0.67 ±0.03)和(1.30±0.14)倍,與對照組相比,差異具有統計學意義(P＜0.05); PPARγ蛋白錶達與mRNA的錶達變化趨勢相似,差異具有統計學意義(P＜0.05).雷帕黴素100 nmol/L、PPARγ阻斷劑GW9662 10 μmol/L、PPARγ增敏劑麯格列酮10 μmol/L分彆處理細胞96 h,ELISA檢測各處理組瘦素錶達量分彆為(19.02 ±0.52)、(15.62 ±0.10)、(14.45±1.01)和(18.07 ±0.66) ng/ml,與對照組相比,差異具有統計學意義(P＜0.05).結論 雷帕黴素通過下調PPARγ的錶達減少脂肪細胞內的脂質蓄積,併且抑製其瘦素分泌,這為臨床上雷帕黴素引起的高脂血癥提供瞭一箇可能的解釋.
목적 탐토뢰파매소대전지방3T3-L1세포지질은태、분비공능적영향,천명뢰파매소인기고지혈증적가능궤제.방법 체외배양전지방세포3T3-L1세포주,분성대조조、뢰파매소50、100、200 nmol/L조.용유홍O염색(정성)급고효액상색보법(정량)검측3T3-L1세포내담고순수평,매련면역흡부실험분석수소、지련소적분비량,실시형광정량PCR법급Western blot법검측3T3-L1세포과양화물매체증식물격활수체γ(PPARγ) mRNA화단백적표체.결과 유홍O염색현시뢰파매소조지방세포지적수량교대조조명현감소；대조조、뢰파매소50、100、200 nmol/L조세포내유리담고순함량분별위(12.89±0.16)、(9.84±0.45)、(9.39 ±0.46)화(8.61 ±0.34) mg/ml,여대조조상비,뢰파매소능억제3T3-L1전지방세포내담고순적축적(P＜0.05).대조조、뢰파매소50、100、200 nmol/L조수소분비량분별위(19.02±0.52)、(16.98±0.01)、(15.62±0.01)화(13.84±0.66)ng/ml,여대조조상비,뢰파매소능감소성숙후3T3-LI지방세포수소적분비수평(P＜0.05).뢰파매소50、100급200 nmol/L조PPARγ mRNA표체량분별위대조조적94％、62％화47％,균현저저우대조조(P＜0.05)；PPARγ단백표체량분별위대조조적80％、74％화61％,균현저저우대조조(P＜0.05).뢰파매소100 nmol/L、PPARγ조단제GW9662 10 μmol/L、PPARγ증민제곡격렬동10 μmol/L분별처리세포96 h,검측PPARγmRNA적표체분별위대조조적(0.60±0.14)、(0.67 ±0.03)화(1.30±0.14)배,여대조조상비,차이구유통계학의의(P＜0.05); PPARγ단백표체여mRNA적표체변화추세상사,차이구유통계학의의(P＜0.05).뢰파매소100 nmol/L、PPARγ조단제GW9662 10 μmol/L、PPARγ증민제곡격렬동10 μmol/L분별처리세포96 h,ELISA검측각처리조수소표체량분별위(19.02 ±0.52)、(15.62 ±0.10)、(14.45±1.01)화(18.07 ±0.66) ng/ml,여대조조상비,차이구유통계학의의(P＜0.05).결론 뢰파매소통과하조PPARγ적표체감소지방세포내적지질축적,병차억제기수소분비,저위림상상뢰파매소인기적고지혈증제공료일개가능적해석.
