中华流行病学杂志
中華流行病學雜誌
중화류행병학잡지
CHINESE JOURNAL OF EPIDEMIOLOGY
2008年
4期
360-364
,共5页
朱兵清%徐丽%李马超%任红宇%田国忠%高源%王艳华%祁国明%阚飙%邵祝军
硃兵清%徐麗%李馬超%任紅宇%田國忠%高源%王豔華%祁國明%闞飆%邵祝軍
주병청%서려%리마초%임홍우%전국충%고원%왕염화%기국명%감표%소축군
脑膜炎奈瑟菌%TaqMan%荧光定量PCR
腦膜炎奈瑟菌%TaqMan%熒光定量PCR
뇌막염내슬균%TaqMan%형광정량PCR
Neisseria meningitidis%TaqMan%Real-Time PCR
目的 建立TaqMan荧光定量PCR检测方法,用于脑膜炎奈瑟菌不同血清群菌株的检测和鉴别.方法 设计合成7对引物和TaqMan探针,脑膜炎奈瑟菌种属特异性的基因为ctrA;不同血清群的脑膜炎奈瑟菌特异性基因分别为A群(sacB)、B群(siaD)、C群(siaD)、X群(xcbB)、Y群(synF)、W135群(synG).检测和确定不同探针和引物用于脑膜炎奈瑟菌荧光定量PCR检测的特异性、敏感性,并同时将荧光定量PCR和乳胶凝集方法应用于121份疑似脑膜炎奈瑟菌感染患者的脑脊液标本的检测.结果 ctrA、sacB、siaD(B群)、siaD(C群)、xcbB、synF、synG等7对引物和探针能准确检测和鉴定79株不同血清群的脑膜炎奈瑟菌菌株,检测灵敏性比相应的普通PCR高101～103倍,每对引物和探针反应体系中,能检测的最低全基因组DNA拷贝数分别为8、8、80、8、8、80、8;检测121份疑似脑膜炎奈瑟菌感染患者的脑脊液标本,TaqMan荧光定量PCR检测11份阳性,乳胶凝集方法检测6份阳性.结论 TaqMan荧光定量PCR方法能特异地检测和鉴定不同血清群脑膜炎奈瑟菌,具有较高的灵敏性和快速检测的特点,能提高临床疑似脑膜炎奈瑟菌感染病例的阳性检出率.
目的 建立TaqMan熒光定量PCR檢測方法,用于腦膜炎奈瑟菌不同血清群菌株的檢測和鑒彆.方法 設計閤成7對引物和TaqMan探針,腦膜炎奈瑟菌種屬特異性的基因為ctrA;不同血清群的腦膜炎奈瑟菌特異性基因分彆為A群(sacB)、B群(siaD)、C群(siaD)、X群(xcbB)、Y群(synF)、W135群(synG).檢測和確定不同探針和引物用于腦膜炎奈瑟菌熒光定量PCR檢測的特異性、敏感性,併同時將熒光定量PCR和乳膠凝集方法應用于121份疑似腦膜炎奈瑟菌感染患者的腦脊液標本的檢測.結果 ctrA、sacB、siaD(B群)、siaD(C群)、xcbB、synF、synG等7對引物和探針能準確檢測和鑒定79株不同血清群的腦膜炎奈瑟菌菌株,檢測靈敏性比相應的普通PCR高101～103倍,每對引物和探針反應體繫中,能檢測的最低全基因組DNA拷貝數分彆為8、8、80、8、8、80、8;檢測121份疑似腦膜炎奈瑟菌感染患者的腦脊液標本,TaqMan熒光定量PCR檢測11份暘性,乳膠凝集方法檢測6份暘性.結論 TaqMan熒光定量PCR方法能特異地檢測和鑒定不同血清群腦膜炎奈瑟菌,具有較高的靈敏性和快速檢測的特點,能提高臨床疑似腦膜炎奈瑟菌感染病例的暘性檢齣率.
목적 건립TaqMan형광정량PCR검측방법,용우뇌막염내슬균불동혈청군균주적검측화감별.방법 설계합성7대인물화TaqMan탐침,뇌막염내슬균충속특이성적기인위ctrA;불동혈청군적뇌막염내슬균특이성기인분별위A군(sacB)、B군(siaD)、C군(siaD)、X군(xcbB)、Y군(synF)、W135군(synG).검측화학정불동탐침화인물용우뇌막염내슬균형광정량PCR검측적특이성、민감성,병동시장형광정량PCR화유효응집방법응용우121빈의사뇌막염내슬균감염환자적뇌척액표본적검측.결과 ctrA、sacB、siaD(B군)、siaD(C군)、xcbB、synF、synG등7대인물화탐침능준학검측화감정79주불동혈청군적뇌막염내슬균균주,검측령민성비상응적보통PCR고101～103배,매대인물화탐침반응체계중,능검측적최저전기인조DNA고패수분별위8、8、80、8、8、80、8;검측121빈의사뇌막염내슬균감염환자적뇌척액표본,TaqMan형광정량PCR검측11빈양성,유효응집방법검측6빈양성.결론 TaqMan형광정량PCR방법능특이지검측화감정불동혈청군뇌막염내슬균,구유교고적령민성화쾌속검측적특점,능제고림상의사뇌막염내슬균감염병례적양성검출솔.
Objective To establish TaqMan Real-Time PcR method for detection and identification of Neisseria meningitidis.Methods Seven sets of primers and FAM-labeled probes targeting different genes of Neisseria meningitidis were designed and synthesized.ctrA gene was used for identification of N.meningitidis species.Six serogruops(A,B,C,X,Y,W135)of N.meningitidis were detected with following genes:sacB(A),siaD(B),siaD(C),xcbB(X),synF(Y)and synG(W135)respectively.Sensitivity and specificity of Real-Time PCR were assessed for different primers and probes.121cerebrospinal fluid(CSF)specimens from suspected N.meningitidis invasive meningitis cases were detected by latex agglutination test and Real-Time PCR assay simultaneously.Resuits 79 N.meningitidis isolates of different serogroups could be detected and identified by seven sets of primers and probes in this study.Real-Time PCR seemed more sensitive than standard PCR bv 101-103 times.The respective sensitivities for ctrA,sacB,siaD(B),siaD(C),xcbB,synF and synG were 8,8,80,8,8,80,8 genomeDNA copies in each reaction.Of the 121 CSF specimens,11 were positive for Real-Time PCR and 6 for latex agglutination test.Conclusion Real-Time PCR could rapidly detect and identify N.meningitidis of different serogroups and seemed more sensitive.It could be widely used for diagnose of invasive meningitis caused bv N.meningitidis.
