中国兽医学报
中國獸醫學報
중국수의학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE
2007年
2期
203-206,210
,共5页
朱秋菊%孙怀昌%赵敏苏%王永娟%李国才
硃鞦菊%孫懷昌%趙敏囌%王永娟%李國纔
주추국%손부창%조민소%왕영연%리국재
鸡蛋清%重组人溶菌酶%鉴定
鷄蛋清%重組人溶菌酶%鑒定
계단청%중조인용균매%감정
为了对鸡输卵管特异表达载体表达的重组人溶菌酶(rhLYZ)的理化及生物学特性进行鉴定,用直接结晶法从重组载体注射鸡蛋清中提取溶菌酶,以兔抗hLYZ血清为一抗,HRP-标记的羊抗免IgG为二抗,进行Western blotting检测,结果表明表达在鸡蛋清中的rhLYZ能被hLYZ特异抗体识别;将纯化的rhLYZ和天然hLYZ在不同温度的水浴中孵育30min,用RBB-R染料标记比色法检测溶菌酶活性的变化,结果显示二者的热稳定性无显著差异;将纯化的rhLYZ和天然hLYZ用不同PH的溶液稀释,40C孵育30min后进行酶的活性测定,结果显示两者在pH3.0～11.0范围内具有活性,最强活性pH为7.0;以12种常见细菌为试验对象,用最小抑菌浓度法测定含rhLYZ蛋清和纯化rhLYZ的溶菌活性,结果显示两者对鲫鱼嗜水气单胞菌、变形杆菌、枯草杆菌、无鞭毛伤寒杆菌、白色念珠菌和柠檬色葡萄球菌具有很强的抑制作用,对痢疾杆菌、白色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有较强的抑制作用,对有鞭毛伤寒杆菌和鳖嗜水气单胞菌无明显的抑制作用.这些试验结果显示,表达在重组载体注射鸡蛋清中的rhLYZ具有与天然hLYZ十分相似的相对分子质量、热稳定性、pH活性范围和溶菌谱.
為瞭對鷄輸卵管特異錶達載體錶達的重組人溶菌酶(rhLYZ)的理化及生物學特性進行鑒定,用直接結晶法從重組載體註射鷄蛋清中提取溶菌酶,以兔抗hLYZ血清為一抗,HRP-標記的羊抗免IgG為二抗,進行Western blotting檢測,結果錶明錶達在鷄蛋清中的rhLYZ能被hLYZ特異抗體識彆;將純化的rhLYZ和天然hLYZ在不同溫度的水浴中孵育30min,用RBB-R染料標記比色法檢測溶菌酶活性的變化,結果顯示二者的熱穩定性無顯著差異;將純化的rhLYZ和天然hLYZ用不同PH的溶液稀釋,40C孵育30min後進行酶的活性測定,結果顯示兩者在pH3.0～11.0範圍內具有活性,最彊活性pH為7.0;以12種常見細菌為試驗對象,用最小抑菌濃度法測定含rhLYZ蛋清和純化rhLYZ的溶菌活性,結果顯示兩者對鯽魚嗜水氣單胞菌、變形桿菌、枯草桿菌、無鞭毛傷寒桿菌、白色唸珠菌和檸檬色葡萄毬菌具有很彊的抑製作用,對痢疾桿菌、白色葡萄毬菌、金黃色葡萄毬菌和大腸桿菌具有較彊的抑製作用,對有鞭毛傷寒桿菌和鱉嗜水氣單胞菌無明顯的抑製作用.這些試驗結果顯示,錶達在重組載體註射鷄蛋清中的rhLYZ具有與天然hLYZ十分相似的相對分子質量、熱穩定性、pH活性範圍和溶菌譜.
위료대계수란관특이표체재체표체적중조인용균매(rhLYZ)적이화급생물학특성진행감정,용직접결정법종중조재체주사계단청중제취용균매,이토항hLYZ혈청위일항,HRP-표기적양항면IgG위이항,진행Western blotting검측,결과표명표체재계단청중적rhLYZ능피hLYZ특이항체식별;장순화적rhLYZ화천연hLYZ재불동온도적수욕중부육30min,용RBB-R염료표기비색법검측용균매활성적변화,결과현시이자적열은정성무현저차이;장순화적rhLYZ화천연hLYZ용불동PH적용액희석,40C부육30min후진행매적활성측정,결과현시량자재pH3.0～11.0범위내구유활성,최강활성pH위7.0;이12충상견세균위시험대상,용최소억균농도법측정함rhLYZ단청화순화rhLYZ적용균활성,결과현시량자대즉어기수기단포균、변형간균、고초간균、무편모상한간균、백색념주균화저몽색포도구균구유흔강적억제작용,대이질간균、백색포도구균、금황색포도구균화대장간균구유교강적억제작용,대유편모상한간균화별기수기단포균무명현적억제작용.저사시험결과현시,표체재중조재체주사계단청중적rhLYZ구유여천연hLYZ십분상사적상대분자질량、열은정성、pH활성범위화용균보.
