CAJ | 학술논문

目的:大量研究表明,类胰岛素生长因子I促成肌细胞增殖作用明显,低浓度水平就有活性,但是对于其作用机制目前还不太清楚.应用流式细胞仪碘化丙啶染色法(PI法)检测成肌细胞生长周期,拟探讨类胰岛素生长因子I对原代及传代人胚骨骼肌成肌细胞体外增殖的作用与机制.方法:实验于2004-06/12在四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室、干细胞与组织工程研究室以及成都市第三人民医院检验科流式细胞室完成.在产妇知情同意的前提下,选取孕8～12周水囊引产胎儿,性别不限,切取部分小腿腓肠肌与股四头肌组织后,采用文献的方法进行成肌细胞分离、纯化与传代培养,实验经医院伦理委员会批准.选取原代、第2、4、6代成肌细胞以1×105 /孔密度接种于24孔板,每3孔为1组计7组.1～7组细胞以无血清F12培养基同步化后分别予以含0,1,2,4,8,16,32 μg/L类胰岛素生长因子I的培养基,运用核素掺入法确定类胰岛素生长因子I促增殖的适宜浓度用于实验.同步化后其中一板的生长培养基不加类胰岛素生长因子I作为对照组;另一个加入适宜浓度的类胰岛素生长因子I作为实验组.每组每天取3孔细胞计数,绘制生长曲线,推算成肌细胞的群体倍增时间,作为细胞增殖周期TC.运用流式细胞技术PI法分别测定细胞生长周期和各亚周期时相时间.结果:4～8 μg/L 类胰岛素生长因子I具有良好促进成肌细胞增殖的能力.各代的实验组与对照组成肌细胞在24 h后进入对数生长期,各实验组细胞生长曲线明显左移.6代以内成肌细胞的增殖周期、各亚周期细胞百分比、各亚周期所占时相以及各代细胞对类胰岛素生长因子I的反应一致,生长模式与能力一致,细胞倍增时间平均从4.8 d缩短到3.3 d.结论:类胰岛素生长因子I能促进成肌细胞体外增殖,成肌细胞的增殖指数明显提高.其促增殖作用是通过缩短DNA合成前期和合成期来实现的. 目的:大量研究錶明,類胰島素生長因子I促成肌細胞增殖作用明顯,低濃度水平就有活性,但是對于其作用機製目前還不太清楚.應用流式細胞儀碘化丙啶染色法(PI法)檢測成肌細胞生長週期,擬探討類胰島素生長因子I對原代及傳代人胚骨骼肌成肌細胞體外增殖的作用與機製.方法:實驗于2004-06/12在四川大學華西醫院生物治療國傢重點實驗室、榦細胞與組織工程研究室以及成都市第三人民醫院檢驗科流式細胞室完成.在產婦知情同意的前提下,選取孕8～12週水囊引產胎兒,性彆不限,切取部分小腿腓腸肌與股四頭肌組織後,採用文獻的方法進行成肌細胞分離、純化與傳代培養,實驗經醫院倫理委員會批準.選取原代、第2、4、6代成肌細胞以1×105 /孔密度接種于24孔闆,每3孔為1組計7組.1～7組細胞以無血清F12培養基同步化後分彆予以含0,1,2,4,8,16,32 μg/L類胰島素生長因子I的培養基,運用覈素摻入法確定類胰島素生長因子I促增殖的適宜濃度用于實驗.同步化後其中一闆的生長培養基不加類胰島素生長因子I作為對照組;另一箇加入適宜濃度的類胰島素生長因子I作為實驗組.每組每天取3孔細胞計數,繪製生長麯線,推算成肌細胞的群體倍增時間,作為細胞增殖週期TC.運用流式細胞技術PI法分彆測定細胞生長週期和各亞週期時相時間.結果:4～8 μg/L 類胰島素生長因子I具有良好促進成肌細胞增殖的能力.各代的實驗組與對照組成肌細胞在24 h後進入對數生長期,各實驗組細胞生長麯線明顯左移.6代以內成肌細胞的增殖週期、各亞週期細胞百分比、各亞週期所佔時相以及各代細胞對類胰島素生長因子I的反應一緻,生長模式與能力一緻,細胞倍增時間平均從4.8 d縮短到3.3 d.結論:類胰島素生長因子I能促進成肌細胞體外增殖,成肌細胞的增殖指數明顯提高.其促增殖作用是通過縮短DNA閤成前期和閤成期來實現的.
목적:대량연구표명,류이도소생장인자I촉성기세포증식작용명현,저농도수평취유활성,단시대우기작용궤제목전환불태청초.응용류식세포의전화병정염색법(PI법)검측성기세포생장주기,의탐토류이도소생장인자I대원대급전대인배골격기성기세포체외증식적작용여궤제.방법:실험우2004-06/12재사천대학화서의원생물치료국가중점실험실、간세포여조직공정연구실이급성도시제삼인민의원검험과류식세포실완성.재산부지정동의적전제하,선취잉8～12주수낭인산태인,성별불한,절취부분소퇴비장기여고사두기조직후,채용문헌적방법진행성기세포분리、순화여전대배양,실험경의원윤리위원회비준.선취원대、제2、4、6대성기세포이1×105 /공밀도접충우24공판,매3공위1조계7조.1～7조세포이무혈청F12배양기동보화후분별여이함0,1,2,4,8,16,32 μg/L류이도소생장인자I적배양기,운용핵소참입법학정류이도소생장인자I촉증식적괄의농도용우실험.동보화후기중일판적생장배양기불가류이도소생장인자I작위대조조;령일개가입괄의농도적류이도소생장인자I작위실험조.매조매천취3공세포계수,회제생장곡선,추산성기세포적군체배증시간,작위세포증식주기TC.운용류식세포기술PI법분별측정세포생장주기화각아주기시상시간.결과:4～8 μg/L 류이도소생장인자I구유량호촉진성기세포증식적능력.각대적실험조여대조조성기세포재24 h후진입대수생장기,각실험조세포생장곡선명현좌이.6대이내성기세포적증식주기、각아주기세포백분비、각아주기소점시상이급각대세포대류이도소생장인자I적반응일치,생장모식여능력일치,세포배증시간평균종4.8 d축단도3.3 d.결론:류이도소생장인자I능촉진성기세포체외증식,성기세포적증식지수명현제고.기촉증식작용시통과축단DNA합성전기화합성기래실현적.