CAJ | 학술논문

为筛选日本乙型脑炎病毒(JEV)的E抗原表位,本实验以抗JEV E蛋白的单克隆抗体(MAb)作为固相筛选分子,应用噬菌体表面展示技术,按消减、结合、洗脱、扩增的顺序筛选噬菌体七肽库,挑取噬菌体单克隆培养并采用MAb包被的ELISA鉴定,对阳性克隆测序分析,确定JEV E抗原模拟表位的氨基酸序列.设计合成包含该表位的E抗原15肽(E-365GGADSMSMAGMAVSYE-379)cDNA序列,与pGEX-KG构建重组表达质粒,诱导表达重组多肽并进行western blot验证.经过4轮筛选后,噬菌体得到高度富集,挑取单克隆采用MAb包被进行ELISA鉴定,有22个克隆呈阳性.对重组多肽进行western blot验证,结果表明该重组多肽能够特异结合兔抗JEV多克隆抗体.本实验成功筛选出JEV结构蛋白E的特异性噬菌体模拟表位,为开展用JEV抗原表位探索JEV的防制研究创造了条件,为多肽疫苗研制、药物筛选以及特异血清学诊断方法的建立提供重要依据.
위사선일본을형뇌염병독(JEV)적E항원표위,본실험이항JEV E단백적단극륭항체(MAb)작위고상사선분자,응용서균체표면전시기술,안소감、결합、세탈、확증적순서사선서균체칠태고,도취서균체단극륭배양병채용MAb포피적ELISA감정,대양성극륭측서분석,학정JEV E항원모의표위적안기산서렬.설계합성포함해표위적E항원15태(E-365GGADSMSMAGMAVSYE-379)cDNA서렬,여pGEX-KG구건중조표체질립,유도표체중조다태병진행western blot험증.경과4륜사선후,서균체득도고도부집,도취단극륭채용MAb포피진행ELISA감정,유22개극륭정양성.대중조다태진행western blot험증,결과표명해중조다태능구특이결합토항JEV다극륭항체.본실험성공사선출JEV결구단백E적특이성서균체모의표위,위개전용JEV항원표위탐색JEV적방제연구창조료조건,위다태역묘연제、약물사선이급특이혈청학진단방법적건립제공중요의거.