CAJ | 학술논문

建立了一条从人血浆中分离高活性凝血因子Ⅷ(FⅧ)的纯化工艺.基于FⅧ和介质孔径的尺度比及其对蛋白质活性影响的分析,设计了以超大孔离子交换制备色谱为核心步骤的新型分离纯化工艺.分别进行超大孔离子交换色谱与传统离子交换色谱的条件优化,并对优化工艺所得产品进行了活性检测(底物显色法)和纯度检测(高效凝胶过滤和凝胶电泳).结果表明,超大孔介质结构不但可以有效地保护蛋白质大分子结构,而且能够大幅度地提高制备色谱的传质速率,从而得到具有高凝血活性的FⅧ产品.FⅧ在超大孔制备色谱过程中的回收率(85％)比传统离子交换制备色谱高4～5倍,产品比活高达154 IU/mg.此外,还研究了超大孔介质的再生程序,采用5个柱体积的1mol/L NaOH低流速清洗色谱柱,保证了色谱工艺的稳定性.本纯化工艺步骤简单,重现性好,易于放大生产.
건립료일조종인혈장중분리고활성응혈인자Ⅷ(FⅧ)적순화공예.기우FⅧ화개질공경적척도비급기대단백질활성영향적분석,설계료이초대공리자교환제비색보위핵심보취적신형분리순화공예.분별진행초대공리자교환색보여전통리자교환색보적조건우화,병대우화공예소득산품진행료활성검측(저물현색법)화순도검측(고효응효과려화응효전영).결과표명,초대공개질결구불단가이유효지보호단백질대분자결구,이차능구대폭도지제고제비색보적전질속솔,종이득도구유고응혈활성적FⅧ산품.FⅧ재초대공제비색보과정중적회수솔(85％)비전통리자교환제비색보고4～5배,산품비활고체154 IU/mg.차외,환연구료초대공개질적재생정서,채용5개주체적적1mol/L NaOH저류속청세색보주,보증료색보공예적은정성.본순화공예보취간단,중현성호,역우방대생산.