实用儿科临床杂志
實用兒科臨床雜誌
실용인과림상잡지
Journal of Applied Clinical Pediatrics
2011年
3期
187-190
,共4页
高吉照%徐鑫%薛天阳%许伟%万才水
高吉照%徐鑫%薛天暘%許偉%萬纔水
고길조%서흠%설천양%허위%만재수
端粒酶反转录酶%RNA干扰%基因表达%蛋白表达%凋亡
耑粒酶反轉錄酶%RNA榦擾%基因錶達%蛋白錶達%凋亡
단립매반전록매%RNA간우%기인표체%단백표체%조망
目的 探讨由载体介导的靶向端粒酶反转录酶(hTERT)基因的RNA干扰(RNAi)技术对白血病HL-60细胞hTERT基因、蛋白表达及细胞凋亡的影响.方法用已经构建好的表达针对hTERT基因siRNA的质粒载体经转染试剂RNAi-Mate转染HL-60细胞;以转染后24 h、72 h、120 h细胞作为实验组,以空质粒、转染试剂及空白组作对照,采用反转录-PCR(RT-PCR)检测细胞hTERT基因mRNA表达,Western blot检测细胞hTERT蛋白表达,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡.结果转染后24 h、72 h、120 h实验组HL-60细胞hTERT基因mRNA相对表达水平分别为0.31±0.08、0.28±0.05、0.32±0.06,质粒组、转染试剂组、空白对照组分别为0.55±0.13、0.49±0.08、0.58±0.19;24 h、72 h、120 h实验组蛋白相对表达水平分别为0.47±0.09、0.32±0.07、0.51±0.08,质粒组、转染试剂组、空白对照组分别为0.75±0.11、0.76±0.15、0.73±0.14;24 h、72 h、120 h实验组,质粒组,转染试剂组,空白对照组凋亡率分别为(11.95±3.61)%、(14.61±2.97)%、(12.82±3.01)%、(4.25±2.16)%、(5.09±1.97)%、(3.76±1.84)%.24 h、72 h、120 h实验组hTERT mRNA、蛋白表达水平均低于各对照组(Pa＜0.05),细胞凋亡率高于各对照组(Pa＜0.05),hTERT mRNA、蛋白表达水平、细胞凋亡率实验组组间比较差异均无统计学意义(Pa＞0.05);质粒组、转染试剂组hTERT mRNA、蛋白表达水平、细胞凋亡率与空白对照组比较差异均无统计学意义(Pa＞0.05).结论载体介导的靶向hTERT基因的RNAi技术能在体外抑制HL-60细胞hTERT基因和蛋白的表达,增加细胞凋亡.
目的 探討由載體介導的靶嚮耑粒酶反轉錄酶(hTERT)基因的RNA榦擾(RNAi)技術對白血病HL-60細胞hTERT基因、蛋白錶達及細胞凋亡的影響.方法用已經構建好的錶達針對hTERT基因siRNA的質粒載體經轉染試劑RNAi-Mate轉染HL-60細胞;以轉染後24 h、72 h、120 h細胞作為實驗組,以空質粒、轉染試劑及空白組作對照,採用反轉錄-PCR(RT-PCR)檢測細胞hTERT基因mRNA錶達,Western blot檢測細胞hTERT蛋白錶達,膜聯蛋白V-異硫氰痠熒光素(Annexin V-FITC)/PI雙染法流式細胞儀檢測細胞凋亡.結果轉染後24 h、72 h、120 h實驗組HL-60細胞hTERT基因mRNA相對錶達水平分彆為0.31±0.08、0.28±0.05、0.32±0.06,質粒組、轉染試劑組、空白對照組分彆為0.55±0.13、0.49±0.08、0.58±0.19;24 h、72 h、120 h實驗組蛋白相對錶達水平分彆為0.47±0.09、0.32±0.07、0.51±0.08,質粒組、轉染試劑組、空白對照組分彆為0.75±0.11、0.76±0.15、0.73±0.14;24 h、72 h、120 h實驗組,質粒組,轉染試劑組,空白對照組凋亡率分彆為(11.95±3.61)%、(14.61±2.97)%、(12.82±3.01)%、(4.25±2.16)%、(5.09±1.97)%、(3.76±1.84)%.24 h、72 h、120 h實驗組hTERT mRNA、蛋白錶達水平均低于各對照組(Pa＜0.05),細胞凋亡率高于各對照組(Pa＜0.05),hTERT mRNA、蛋白錶達水平、細胞凋亡率實驗組組間比較差異均無統計學意義(Pa＞0.05);質粒組、轉染試劑組hTERT mRNA、蛋白錶達水平、細胞凋亡率與空白對照組比較差異均無統計學意義(Pa＞0.05).結論載體介導的靶嚮hTERT基因的RNAi技術能在體外抑製HL-60細胞hTERT基因和蛋白的錶達,增加細胞凋亡.
목적 탐토유재체개도적파향단립매반전록매(hTERT)기인적RNA간우(RNAi)기술대백혈병HL-60세포hTERT기인、단백표체급세포조망적영향.방법용이경구건호적표체침대hTERT기인siRNA적질립재체경전염시제RNAi-Mate전염HL-60세포;이전염후24 h、72 h、120 h세포작위실험조,이공질립、전염시제급공백조작대조,채용반전록-PCR(RT-PCR)검측세포hTERT기인mRNA표체,Western blot검측세포hTERT단백표체,막련단백V-이류청산형광소(Annexin V-FITC)/PI쌍염법류식세포의검측세포조망.결과전염후24 h、72 h、120 h실험조HL-60세포hTERT기인mRNA상대표체수평분별위0.31±0.08、0.28±0.05、0.32±0.06,질립조、전염시제조、공백대조조분별위0.55±0.13、0.49±0.08、0.58±0.19;24 h、72 h、120 h실험조단백상대표체수평분별위0.47±0.09、0.32±0.07、0.51±0.08,질립조、전염시제조、공백대조조분별위0.75±0.11、0.76±0.15、0.73±0.14;24 h、72 h、120 h실험조,질립조,전염시제조,공백대조조조망솔분별위(11.95±3.61)%、(14.61±2.97)%、(12.82±3.01)%、(4.25±2.16)%、(5.09±1.97)%、(3.76±1.84)%.24 h、72 h、120 h실험조hTERT mRNA、단백표체수평균저우각대조조(Pa＜0.05),세포조망솔고우각대조조(Pa＜0.05),hTERT mRNA、단백표체수평、세포조망솔실험조조간비교차이균무통계학의의(Pa＞0.05);질립조、전염시제조hTERT mRNA、단백표체수평、세포조망솔여공백대조조비교차이균무통계학의의(Pa＞0.05).결론재체개도적파향hTERT기인적RNAi기술능재체외억제HL-60세포hTERT기인화단백적표체,증가세포조망.
