第一军医大学学报
第一軍醫大學學報
제일군의대학학보
JOURNAL OF FIRST MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
2001年
8期
561-564
,共4页
陈晓光%杨培梁%李华%龚娅%冯明钊
陳曉光%楊培樑%李華%龔婭%馮明釗
진효광%양배량%리화%공아%풍명쇠
弓形虫感染%基因表达%寄生虫学
弓形蟲感染%基因錶達%寄生蟲學
궁형충감염%기인표체%기생충학
目的在原核系统中高效表达弓形虫表面抗原SAG1并利用重组抗原检测弓形虫感染.方法将截短的SAG1基因经PCR扩增后,定向亚克隆入原核表达载体pET-30a(+),酶切鉴定出阳性重组子并经序列测定证实读码框正确,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导表达,对融合的表达产物进行纯化和复性,通过免疫印迹和ELISA实验检测其特异的免疫反应性.结果成功构建截短型SAG1在原核系统中的重组表达质粒,并以融合蛋白的形式在大肠杆菌中得到了高效表达,其表达量占细菌裂解液中总蛋白量的31.58%.经过简易的纯化和复性过程,该重组抗原(rSAG1)能被弓形虫感染的人血清所识别.用rSAG1构建的ELISA试剂盒对弓形虫病的检测具有高度的敏感性和特异性.结论截短型SAG1在大肠杆菌中得到了高效表达,重组抗原经纯化和复性后,能有效检测弓形虫的感染,可用于构建弓形虫病检测试剂盒.
目的在原覈繫統中高效錶達弓形蟲錶麵抗原SAG1併利用重組抗原檢測弓形蟲感染.方法將截短的SAG1基因經PCR擴增後,定嚮亞剋隆入原覈錶達載體pET-30a(+),酶切鑒定齣暘性重組子併經序列測定證實讀碼框正確,將重組質粒轉化大腸桿菌BL21(DE3),以IPTG誘導錶達,對融閤的錶達產物進行純化和複性,通過免疫印跡和ELISA實驗檢測其特異的免疫反應性.結果成功構建截短型SAG1在原覈繫統中的重組錶達質粒,併以融閤蛋白的形式在大腸桿菌中得到瞭高效錶達,其錶達量佔細菌裂解液中總蛋白量的31.58%.經過簡易的純化和複性過程,該重組抗原(rSAG1)能被弓形蟲感染的人血清所識彆.用rSAG1構建的ELISA試劑盒對弓形蟲病的檢測具有高度的敏感性和特異性.結論截短型SAG1在大腸桿菌中得到瞭高效錶達,重組抗原經純化和複性後,能有效檢測弓形蟲的感染,可用于構建弓形蟲病檢測試劑盒.
목적재원핵계통중고효표체궁형충표면항원SAG1병이용중조항원검측궁형충감염.방법장절단적SAG1기인경PCR확증후,정향아극륭입원핵표체재체pET-30a(+),매절감정출양성중조자병경서렬측정증실독마광정학,장중조질립전화대장간균BL21(DE3),이IPTG유도표체,대융합적표체산물진행순화화복성,통과면역인적화ELISA실험검측기특이적면역반응성.결과성공구건절단형SAG1재원핵계통중적중조표체질립,병이융합단백적형식재대장간균중득도료고효표체,기표체량점세균렬해액중총단백량적31.58%.경과간역적순화화복성과정,해중조항원(rSAG1)능피궁형충감염적인혈청소식별.용rSAG1구건적ELISA시제합대궁형충병적검측구유고도적민감성화특이성.결론절단형SAG1재대장간균중득도료고효표체,중조항원경순화화복성후,능유효검측궁형충적감염,가용우구건궁형충병검측시제합.
