CAJ | 학술논문

目的:分析人CCRK基因启动子、启动子的核心序列及与其表达相关的转录因子.方法:采用5′-RACE技术鉴定人CCRK基因的转录起始点;对启动子区3′端3个截短片段255 bp(-367/-128),210 bp(-322/-128)和160 bp(-272/-128)进行删除分析,双荧光素酶分析测出的最小活性片段作为核心启动子的上游位点.通过生物软件MatInspector V2.2分析核心启动子区域,寻找并推测重要的转录因子,并对其核心序列进行定点突变分析,再通过电泳迁移率(EMSA)实验加以鉴定.结果:采用5′-RACE技术,得到的PCR产物直接测序,定位-242 "T"为转录起始点;通过启动子3′端小片段删除分析,255,210和160 bp均无活性,由此判断3′端255个核苷酸不存在核心启动子序列,并定位一段74 bp的区域为核心启动子(-441/-367)区域.通过MatInspector软件分析,发现在这段核心启动子区域内有3个重要的结合位点:Delta EF-1,NF-κB和Sp1.对这3个结合位点的核心序列进行定点突变后瞬时转染U373,经双荧光素酶分析发现Delta EF-1的活性明显升高,NF-κB没有变化,Sp1的活性降低但不太明显.进一步通过电泳迁移率(EMSA)实验鉴定,Delta EF-1和NF-κB能与U373核蛋白形成特异性的DNA-蛋白质复合体,表明Delta EF-1和NF-κB两个转录因子与人CCRK基因表达相关.结论:对人CCRK启动子的特性研究,为今后认识该基因的转录调控机制打下了基础,为揭示恶性神经胶质瘤的发生机制及防治措施的研究提供了新的思路.
목적:분석인CCRK기인계동자、계동자적핵심서렬급여기표체상관적전록인자.방법:채용5′-RACE기술감정인CCRK기인적전록기시점;대계동자구3′단3개절단편단255 bp(-367/-128),210 bp(-322/-128)화160 bp(-272/-128)진행산제분석,쌍형광소매분석측출적최소활성편단작위핵심계동자적상유위점.통과생물연건MatInspector V2.2분석핵심계동자구역,심조병추측중요적전록인자,병대기핵심서렬진행정점돌변분석,재통과전영천이솔(EMSA)실험가이감정.결과:채용5′-RACE기술,득도적PCR산물직접측서,정위-242 "T"위전록기시점;통과계동자3′단소편단산제분석,255,210화160 bp균무활성,유차판단3′단255개핵감산불존재핵심계동자서렬,병정위일단74 bp적구역위핵심계동자(-441/-367)구역.통과MatInspector연건분석,발현재저단핵심계동자구역내유3개중요적결합위점:Delta EF-1,NF-κB화Sp1.대저3개결합위점적핵심서렬진행정점돌변후순시전염U373,경쌍형광소매분석발현Delta EF-1적활성명현승고,NF-κB몰유변화,Sp1적활성강저단불태명현.진일보통과전영천이솔(EMSA)실험감정,Delta EF-1화NF-κB능여U373핵단백형성특이성적DNA-단백질복합체,표명Delta EF-1화NF-κB량개전록인자여인CCRK기인표체상관.결론:대인CCRK계동자적특성연구,위금후인식해기인적전록조공궤제타하료기출,위게시악성신경효질류적발생궤제급방치조시적연구제공료신적사로.