CAJ | 학술논문

目的曲分离纯化新生猪胰岛细胞团(NPCCs),以不同的体外培养方式促进NPCCs成熟,筛选最佳方案.方法利用供龄分别为3天的新生猪,参考Bonner-Weir法和Hill法分离纯化NPCCs,分别以培养体系I(90%DMEM、10%胎牛血清、双抗、2 mmol/L谷氨酰胺+0.01%大豆胰酶抑制剂)和培养体系Ⅱ(90% DMEM、10%胎牛血清、双抗、2 mmol/L谷氨酰胺+0.01%大豆胰酶抑制剂、10 mmol/L烟碱、10 ng/mL表皮细胞生长因子、15 ng/mL胰岛索样生长因子)体外培养14天,进行抗胰岛素、抗CK7双荧光染色和胰岛素刺激释放实验.结果应用培养体系I的NPCCs体外培养14天时,抗胰岛素阳性细胞(β细胞)百分比为(28.6±5.3)%.显著低于培养体系Ⅱ的(62.1±9.0)%(P＜0.01);培养体系Ⅰ的抗CK7阳性细胞(原始导管细胞)百分比为(52.8±7.2)%,显著高于培养体系Ⅱ的(21.5±6.9)%(P＜0.01).培养体系Ⅰ的NPCCs体外培养14天时胰岛素刺激释放量为:低糖:(14.3±4.8)mU/L,高糖:(23.9±6.2)mU/L,高糖+茶碱:(38.5±8.2)mU/L,显著低于培养体系Ⅱ的释放量:(26.2±5.1)mU/L、(46.3±7.0)mU/L、(81.5±10.4)mU/L(P＜0.01).结论培养体系Ⅱ较培养体系Ⅰ更能促进NPCCs中B细胞发育成熟及CK7阳性细胞向β细胞转化,并使胰岛素刺激释放量提高.培养体系Ⅱ是微囊和移植前体外培养NPCCs的理想方案之一.
목적 곡분리순화신생저이도세포단(NPCCs),이불동적체외배양방식촉진NPCCs성숙,사선최가방안.방법 이용공령분별위3천적신생저,삼고Bonner-Weir법화Hill법분리순화NPCCs,분별이배양체계I(90%DMEM、10%태우혈청、쌍항、2 mmol/L곡안선알+0.01%대두이매억제제)화배양체계Ⅱ(90% DMEM、10%태우혈청、쌍항、2 mmol/L곡안선알+0.01%대두이매억제제、10 mmol/L연감、10 ng/mL표피세포생장인자、15 ng/mL이도색양생장인자)체외배양14천,진행항이도소、항CK7쌍형광염색화이도소자격석방실험.결과 응용배양체계I적NPCCs체외배양14천시,항이도소양성세포(β세포)백분비위(28.6±5.3)%.현저저우배양체계Ⅱ적(62.1±9.0)%(P＜0.01);배양체계Ⅰ적항CK7양성세포(원시도관세포)백분비위(52.8±7.2)%,현저고우배양체계Ⅱ적(21.5±6.9)%(P＜0.01).배양체계Ⅰ적NPCCs체외배양14천시이도소자격석방량위:저당:(14.3±4.8)mU/L,고당:(23.9±6.2)mU/L,고당+다감:(38.5±8.2)mU/L,현저저우배양체계Ⅱ적석방량:(26.2±5.1)mU/L、(46.3±7.0)mU/L、(81.5±10.4)mU/L(P＜0.01).결론 배양체계Ⅱ교배양체계Ⅰ경능촉진NPCCs중B세포발육성숙급CK7양성세포향β세포전화,병사이도소자격석방량제고.배양체계Ⅱ시미낭화이식전체외배양NPCCs적이상방안지일.