CAJ | 학술논문

根据三角帆蚌消减杂交cDNA文库获得的EST序列,运用cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术获得三角帆蚌Rab3基因的全长cDNA序列(GenBank登录号为 HQ190954).序列全长1 707 bp,开放阅读框666 bp,编码221个氨基酸,5’端非编码区为158bp,3’端非编码区为883 bp.NCBI Blastp进行氨基酸序列相似性分析表明,与居蟹皮海绵(Suberites domuncula)的Rab-31ike(SdRab3)氨基酸相似性最高,为64％.以氨基酸序列构建进化树,首先与居蟹皮海绵的Rab3-1ike(SdRab3)聚为一支.原核表达结果表明,在30℃,5h,1mmol/L IPTG的诱导条件下,Rab3蛋白得到高效表达,重组菌体经裂解和SDS-PAGE电泳分析,发现一条26 kD左右特异的蛋白表达条带,其表达量约占菌体总蛋白30％.用嗜水气单孢菌感染三角帆蚌后,Western-blot检测表明,在健康组和病变三角帆蚌肝脏中,Rab3蛋白与β-actin的表达量比值分别为0.438和0.580,说明Rab3基因在三角帆蚌经病原菌侵染后,表达量上调.初步推测三角帆蚌Rab3蛋白可能与三角帆蚌瘟病有关.
근거삼각범방소감잡교cDNA문고획득적EST서렬,운용cDNA말단쾌속확증(rapid amplification of cDNA ends,RACE)기술획득삼각범방Rab3기인적전장cDNA서렬(GenBank등록호위 HQ190954).서렬전장1 707 bp,개방열독광666 bp,편마221개안기산,5’단비편마구위158bp,3’단비편마구위883 bp.NCBI Blastp진행안기산서렬상사성분석표명,여거해피해면(Suberites domuncula)적Rab-31ike(SdRab3)안기산상사성최고,위64％.이안기산서렬구건진화수,수선여거해피해면적Rab3-1ike(SdRab3)취위일지.원핵표체결과표명,재30℃,5h,1mmol/L IPTG적유도조건하,Rab3단백득도고효표체,중조균체경렬해화SDS-PAGE전영분석,발현일조26 kD좌우특이적단백표체조대,기표체량약점균체총단백30％.용기수기단포균감염삼각범방후,Western-blot검측표명,재건강조화병변삼각범방간장중,Rab3단백여β-actin적표체량비치분별위0.438화0.580,설명Rab3기인재삼각범방경병원균침염후,표체량상조.초보추측삼각범방Rab3단백가능여삼각범방온병유관.