植物病理学报
植物病理學報
식물병이학보
ACTA PHYTOPATHOLOGICA SINICA
2010年
5期
475-481
,共7页
童勋章%王亚军%谢忠奎%张玉宝%安丽萍%郭志鸿%郭芳
童勛章%王亞軍%謝忠奎%張玉寶%安麗萍%郭誌鴻%郭芳
동훈장%왕아군%사충규%장옥보%안려평%곽지홍%곽방
百合斑驳病毒%外壳蛋白%细胞质内含体%抗体%DAS-ELISA%病毒检测
百閤斑駁病毒%外殼蛋白%細胞質內含體%抗體%DAS-ELISA%病毒檢測
백합반박병독%외각단백%세포질내함체%항체%DAS-ELISA%병독검측
采用RT-PCR方法从甘肃地区引种的切花百合上克隆了百合斑驳病毒(Lily mottle virus,LMoV)的外壳蛋白(coat protein,CP)基因与细胞质内含体(cytoplasmic inclusions,Cl)基因的3'端600 bp片段,连接到原核表达载体pET-28a(+)上.构建了融合表达的重组质粒pET-28a-CP-CL200.重组质粒转化大肠杆菌BL21成功表达了融合蛋白CP-C1200.经镍柱亲和层析获得纯化的融合蛋白,进一步用其免疫家兔制备了多克隆抗体.Western Blot结果显示,该多抗与感染LMoV的百合叶片中的病毒CP与CI均发生特异性反应,而对健康百合叶片无反应.用该多抗建立双抗夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA)检测百合叶片样品,相对于RT-PCR方法其灵敏度和特异性均达到了93.3%.研究结果为快速、准确检测百合斑驳病毒的试剂盒研制奠定了基础.
採用RT-PCR方法從甘肅地區引種的切花百閤上剋隆瞭百閤斑駁病毒(Lily mottle virus,LMoV)的外殼蛋白(coat protein,CP)基因與細胞質內含體(cytoplasmic inclusions,Cl)基因的3'耑600 bp片段,連接到原覈錶達載體pET-28a(+)上.構建瞭融閤錶達的重組質粒pET-28a-CP-CL200.重組質粒轉化大腸桿菌BL21成功錶達瞭融閤蛋白CP-C1200.經鎳柱親和層析穫得純化的融閤蛋白,進一步用其免疫傢兔製備瞭多剋隆抗體.Western Blot結果顯示,該多抗與感染LMoV的百閤葉片中的病毒CP與CI均髮生特異性反應,而對健康百閤葉片無反應.用該多抗建立雙抗夾心酶聯免疫吸附法(DAS-ELISA)檢測百閤葉片樣品,相對于RT-PCR方法其靈敏度和特異性均達到瞭93.3%.研究結果為快速、準確檢測百閤斑駁病毒的試劑盒研製奠定瞭基礎.
채용RT-PCR방법종감숙지구인충적절화백합상극륭료백합반박병독(Lily mottle virus,LMoV)적외각단백(coat protein,CP)기인여세포질내함체(cytoplasmic inclusions,Cl)기인적3'단600 bp편단,련접도원핵표체재체pET-28a(+)상.구건료융합표체적중조질립pET-28a-CP-CL200.중조질립전화대장간균BL21성공표체료융합단백CP-C1200.경얼주친화층석획득순화적융합단백,진일보용기면역가토제비료다극륭항체.Western Blot결과현시,해다항여감염LMoV적백합협편중적병독CP여CI균발생특이성반응,이대건강백합협편무반응.용해다항건립쌍항협심매련면역흡부법(DAS-ELISA)검측백합협편양품,상대우RT-PCR방법기령민도화특이성균체도료93.3%.연구결과위쾌속、준학검측백합반박병독적시제합연제전정료기출.
