CAJ | 학술논문

为准确、全面研究超低温冷冻技术对山羊附睾精子线粒体膜电位的影响效果,本试验采用荧光探针JC-1单标和JC-1/PI双标2种荧光染色方法,通过流式细胞仪和荧光显微镜两种检测手段对精子线粒体膜电位(Mitochondrial membrane potential,MMP)变化进行检测分析,用JC-1单独染色,能准确、快速地区分高、低MMP精子,但不能明确区分精子的存活状态,采用JC-1与碘化丙啶(Propidium iodide,PI)双标法,则能明显判定精子的存活状态.通过对绒山羊附睾精子在冷冻前和解冻后线粒体膜电位检测,结果表明,单标记后高MMP精子尾部呈橙红色,低MMP精子尾部为绿色；双标后死亡精子头部呈红色(PI+).对两种检测手段的比较研究,结果显示,荧光显微镜能够有效地区分出高、低MMP及死精子,但对于活精子中MMP的高低检测效果不理想；流式细胞仪则能够有效地区分活精子MMP的高低,而且结果准确,速度快,敏感性高.试验表明,两种检测方法相关性很高,分析同一处理样品时用JC+%和JC+/PI-%检测结果呈显著正相关(r=0.815,r=0.982,P＜0.01).因此,对于精子线粒体MMP的分析,采用JC-1单染与JC-1/PI双染的方法,利用流式细胞仪与荧光显微镜进行联合检测,能比较全面、准确的反映出精子线粒体的功能状态.
위준학、전면연구초저온냉동기술대산양부고정자선립체막전위적영향효과,본시험채용형광탐침JC-1단표화JC-1/PI쌍표2충형광염색방법,통과류식세포의화형광현미경량충검측수단대정자선립체막전위(Mitochondrial membrane potential,MMP)변화진행검측분석,용JC-1단독염색,능준학、쾌속지구분고、저MMP정자,단불능명학구분정자적존활상태,채용JC-1여전화병정(Propidium iodide,PI)쌍표법,칙능명현판정정자적존활상태.통과대융산양부고정자재냉동전화해동후선립체막전위검측,결과표명,단표기후고MMP정자미부정등홍색,저MMP정자미부위록색；쌍표후사망정자두부정홍색(PI+).대량충검측수단적비교연구,결과현시,형광현미경능구유효지구분출고、저MMP급사정자,단대우활정자중MMP적고저검측효과불이상；류식세포의칙능구유효지구분활정자MMP적고저,이차결과준학,속도쾌,민감성고.시험표명,량충검측방법상관성흔고,분석동일처리양품시용JC+%화JC+/PI-%검측결과정현저정상관(r=0.815,r=0.982,P＜0.01).인차,대우정자선립체MMP적분석,채용JC-1단염여JC-1/PI쌍염적방법,이용류식세포의여형광현미경진행연합검측,능비교전면、준학적반영출정자선립체적공능상태.