CAJ | 학술논문

针对马铃薯生产中危害严重、分布广泛并且具有强烈协生作用的马铃薯X病毒和马铃薯Y病毒,开展了抗病毒病的育种研究.采用RT-PCR技术分别克隆了267 bp的编码马铃薯X病毒外壳蛋白(PVX-cp)基因的相对保守区段X和294 bp的编码马铃薯Y病毒外壳蛋白(PVY-cp)基因的相对保守区段Y两个片段,将其按顺序连接,形成融合基因XY,然后分别将融合基因XY正向和反向插入到载体pHANNIBAL中,得到了载体pHIV,再用NotI对pHIV进行酶切,将产生的大片段插入到载体pART27中,得到同时以PVX-cp基因和PVY-cp基因为靶标的XY的RNAi载体pARIV.采用微束激光穿刺转化技术转化马铃薯品种Favorita的愈伤组织,得到了14株表型正常的转基因植株,转基因植株的southern blot分析表明,导入的外源融合基因拷贝数介于2～4之间.攻毒实验表明,其中11株转基因植株对PVX、PVY°以及PVX和PVY°混合侵染均表现免疫,而其它3株的病毒浓度也低于对照.这一结果将为利用RNAi干涉技术开展植物抗多种病毒病的育种提供重要依据,验证了所构建的RNA干涉(RNA interference RNAi)载体具有良好的功能,同时又一次证明微束激光穿刺法是一种有效的遗传转化手段.
침대마령서생산중위해엄중、분포엄범병차구유강렬협생작용적마령서X병독화마령서Y병독,개전료항병독병적육충연구.채용RT-PCR기술분별극륭료267 bp적편마마령서X병독외각단백(PVX-cp)기인적상대보수구단X화294 bp적편마마령서Y병독외각단백(PVY-cp)기인적상대보수구단Y량개편단,장기안순서련접,형성융합기인XY,연후분별장융합기인XY정향화반향삽입도재체pHANNIBAL중,득도료재체pHIV,재용NotI대pHIV진행매절,장산생적대편단삽입도재체pART27중,득도동시이PVX-cp기인화PVY-cp기인위파표적XY적RNAi재체pARIV.채용미속격광천자전화기술전화마령서품충Favorita적유상조직,득도료14주표형정상적전기인식주,전기인식주적southern blot분석표명,도입적외원융합기인고패수개우2～4지간.공독실험표명,기중11주전기인식주대PVX、PVY°이급PVX화PVY°혼합침염균표현면역,이기타3주적병독농도야저우대조.저일결과장위이용RNAi간섭기술개전식물항다충병독병적육충제공중요의거,험증료소구건적RNA간섭(RNA interference RNAi)재체구유량호적공능,동시우일차증명미속격광천자법시일충유효적유전전화수단.