上海交通大学学报（农业科学版）
上海交通大學學報（農業科學版）
상해교통대학학보（농업과학판）
JOURNAL OF SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY(AGRICULTURAL SCIENCE)
2006年
5期
460-464,470
,共6页
邢丽苹%沈立荣%乌晓云%施婉君%高其康%程家安%张传溪
邢麗蘋%瀋立榮%烏曉雲%施婉君%高其康%程傢安%張傳溪
형려평%침립영%오효운%시완군%고기강%정가안%장전계
王浆多肽%中华蜜蜂%序列分析%原核表达
王漿多肽%中華蜜蜂%序列分析%原覈錶達
왕장다태%중화밀봉%서렬분석%원핵표체
构建中华蜜蜂(Apis cerana cerana)工蜂头部cDNA文库并进行了测序,从8568个表达序列标签(expression sequence tag,EST)中获得96个Apisimin基因克隆,结果表明Apisimin基因是一个高丰度转录的基因.进一步对克隆分析表明该基因cDNA全长为379 nt,包含一个237nt、可以编码78个氨基酸的ORF.推导的Apisimin蛋白N端含有一个由24个氨基酸残基组成的信号肽,后端为54残基、预计分子量为5.9kDa的成熟肽.该ORF与意大利蜜蜂和印度蜜蜂的Apisimin基因核苷酸同源性分别为100%和95%.将成熟肽编码区进行亚克隆,构建了Apisimin与谷胱甘肽转移酶融合表达的载体pGEX/apisimin,并将重组载体转化入大肠杆菌BL21(DE3)进行融合表达.SDS-PAGE和薄层扫描表明,表达的融合蛋白分子量为31 kDa,表达量占细菌总蛋白的22.1%,约50%是可溶性的.通过亲和柱进一步纯化了表达的融合蛋白.
構建中華蜜蜂(Apis cerana cerana)工蜂頭部cDNA文庫併進行瞭測序,從8568箇錶達序列標籤(expression sequence tag,EST)中穫得96箇Apisimin基因剋隆,結果錶明Apisimin基因是一箇高豐度轉錄的基因.進一步對剋隆分析錶明該基因cDNA全長為379 nt,包含一箇237nt、可以編碼78箇氨基痠的ORF.推導的Apisimin蛋白N耑含有一箇由24箇氨基痠殘基組成的信號肽,後耑為54殘基、預計分子量為5.9kDa的成熟肽.該ORF與意大利蜜蜂和印度蜜蜂的Apisimin基因覈苷痠同源性分彆為100%和95%.將成熟肽編碼區進行亞剋隆,構建瞭Apisimin與穀胱甘肽轉移酶融閤錶達的載體pGEX/apisimin,併將重組載體轉化入大腸桿菌BL21(DE3)進行融閤錶達.SDS-PAGE和薄層掃描錶明,錶達的融閤蛋白分子量為31 kDa,錶達量佔細菌總蛋白的22.1%,約50%是可溶性的.通過親和柱進一步純化瞭錶達的融閤蛋白.
구건중화밀봉(Apis cerana cerana)공봉두부cDNA문고병진행료측서,종8568개표체서렬표첨(expression sequence tag,EST)중획득96개Apisimin기인극륭,결과표명Apisimin기인시일개고봉도전록적기인.진일보대극륭분석표명해기인cDNA전장위379 nt,포함일개237nt、가이편마78개안기산적ORF.추도적Apisimin단백N단함유일개유24개안기산잔기조성적신호태,후단위54잔기、예계분자량위5.9kDa적성숙태.해ORF여의대리밀봉화인도밀봉적Apisimin기인핵감산동원성분별위100%화95%.장성숙태편마구진행아극륭,구건료Apisimin여곡광감태전이매융합표체적재체pGEX/apisimin,병장중조재체전화입대장간균BL21(DE3)진행융합표체.SDS-PAGE화박층소묘표명,표체적융합단백분자량위31 kDa,표체량점세균총단백적22.1%,약50%시가용성적.통과친화주진일보순화료표체적융합단백.
