CAJ | 학술논문

结合生物信息学方法与已知癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen, CEA)特异性单链抗体(Single chain Fv fragment, scFv)核苷酸序列, 经分子设计和密码子优化后, 通过化学方法合成CEA二硫键稳定性单链抗体(Disulfide stabilized single chain Fv fragments, scdsFv)基因片段. 将凋亡素基因(Apoptin)通过一段柔性连接肽(Linker)连接在CEA scdsFv基因下游, 并克隆入大肠杆菌表达载体质粒pET28a, 转化BL21感受态菌后经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside, IPTG)诱导, 表达融合蛋白CAtin.SDS-PAGE和Western-Blot分析表明, 目的蛋白得到良好表达, 经条件优化后表达量最高可达44.1 mg/L. 融合蛋白经分步洗涤法和谷胱甘肽对表达的目的蛋白进行初步纯化和复性后, 利用人肝癌细胞(HCC)对所制备融合蛋白进行亲和力测定、细胞结合活性测定和特异性细胞杀伤活性分析.结果显示, 所制备融合蛋白不仅能够有效地与上述肿瘤细胞结合, 并对其具有明显的杀伤活性, 表明成功制备了具有特异性识别和特异性杀伤活性的双特异抗肿瘤免疫导向制剂.
결합생물신식학방법여이지암배항원(Carcinoembryonic antigen, CEA)특이성단련항체(Single chain Fv fragment, scFv)핵감산서렬, 경분자설계화밀마자우화후, 통과화학방법합성CEA이류건은정성단련항체(Disulfide stabilized single chain Fv fragments, scdsFv)기인편단. 장조망소기인(Apoptin)통과일단유성련접태(Linker)련접재CEA scdsFv기인하유, 병극륭입대장간균표체재체질립pET28a, 전화BL21감수태균후경이병기-β-D-류대반유당감(Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside, IPTG)유도, 표체융합단백CAtin.SDS-PAGE화Western-Blot분석표명, 목적단백득도량호표체, 경조건우화후표체량최고가체44.1 mg/L. 융합단백경분보세조법화곡광감태대표체적목적단백진행초보순화화복성후, 이용인간암세포(HCC)대소제비융합단백진행친화력측정、세포결합활성측정화특이성세포살상활성분석.결과현시, 소제비융합단백불부능구유효지여상술종류세포결합, 병대기구유명현적살상활성, 표명성공제비료구유특이성식별화특이성살상활성적쌍특이항종류면역도향제제.