CAJ | 학술논문

目的运用双向荧光差异凝胶电泳结合质谱技术寻找极低密度脂蛋白(VLDL)致诱导分化的THP-1细胞形成泡沫细胞中的关键蛋白质,以期揭示其致泡沫细胞的机制.方法 THP-1细胞经佛波醇脂(PMA)诱导分化为巨噬细胞,以磷酸盐缓冲液(PBS)孵育为空白对照组、VLDL孵育为实验组.提取细胞总蛋白后分别用荧光染料CY3和CY5标记,以所有样本等量混合作为“内标”,用CY2标记,然后将实验组、空白对照组及内标混合后进行二维电泳,扫描图像后经分析的差异蛋白做基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱( MALDI-TOF-MS).采用逆转录-聚合酶链反应(RT-CPR)分析3种蛋白质(脂肪分化相关蛋白、烯醇化酶1、磷酸甘油酸变位酶1)mRNA的变化.结果实验组与空白对照组比较,表达量上调蛋白点在1.2倍以上有34个,表达量下调1.2倍以上有48个.通过软件筛选其中14个有差异的蛋白点做MALDI-TOF-MS,其中脂肪分化相关蛋白、热休克蛋白27、人电子转移味蛋白三维结构-链A、s100钙结合蛋白、人过氧化物酶-3-异构体c、辅酶-细胞色素C还原酶核心蛋白Ⅰ、过氧化物酶烯酰辅酶A水合酶样蛋白、富马酸合酶-异构体d表达增高,烯醇化酶1、磷酸甘油酸变位酶1、环孢素A结合双肽甘氨酸-脯氨酸复合物、DMGDH蛋白、核内不均一核糖核蛋白L-异构体a、果糖胺3激酶-异构体b表达降低.脂肪分化相关蛋白mRNA表达明显上调,烯醇化酶1、磷酸甘油酸变位酶1 mRNA表达明显下调,与蛋白水平变化一致.结论荧光差异凝胶电泳能在整体上揭示VLDL在致泡沫细胞形成过程中蛋白质水平的变化,经鉴定的蛋白质可能在VLDL致泡沫细胞的形成中发挥重要的作用,为阐明VLDL作用巨噬细胞形成泡沫细胞的机制奠定了基础.
목적 운용쌍향형광차이응효전영결합질보기술심조겁저밀도지단백(VLDL)치유도분화적THP-1세포형성포말세포중적관건단백질,이기게시기치포말세포적궤제.방법 THP-1세포경불파순지(PMA)유도분화위거서세포,이린산염완충액(PBS)부육위공백대조조、VLDL부육위실험조.제취세포총단백후분별용형광염료CY3화CY5표기,이소유양본등량혼합작위“내표”,용CY2표기,연후장실험조、공백대조조급내표혼합후진행이유전영,소묘도상후경분석적차이단백주기질보조격광해흡전리비행시간질보( MALDI-TOF-MS).채용역전록-취합매련반응(RT-CPR)분석3충단백질(지방분화상관단백、희순화매1、린산감유산변위매1)mRNA적변화.결과 실험조여공백대조조비교,표체량상조단백점재1.2배이상유34개,표체량하조1.2배이상유48개.통과연건사선기중14개유차이적단백점주MALDI-TOF-MS,기중지방분화상관단백、열휴극단백27、인전자전이미단백삼유결구-련A、s100개결합단백、인과양화물매-3-이구체c、보매-세포색소C환원매핵심단백Ⅰ、과양화물매희선보매A수합매양단백、부마산합매-이구체d표체증고,희순화매1、린산감유산변위매1、배포소A결합쌍태감안산-포안산복합물、DMGDH단백、핵내불균일핵당핵단백L-이구체a、과당알3격매-이구체b표체강저.지방분화상관단백mRNA표체명현상조,희순화매1、린산감유산변위매1 mRNA표체명현하조,여단백수평변화일치.결론 형광차이응효전영능재정체상게시VLDL재치포말세포형성과정중단백질수평적변화,경감정적단백질가능재VLDL치포말세포적형성중발휘중요적작용,위천명VLDL작용거서세포형성포말세포적궤제전정료기출.