中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2009年
7期
501-504
,共4页
王艳丽%李俊辉%姜永萍%夏俊%裴磊%冉多良%陈化兰
王豔麗%李俊輝%薑永萍%夏俊%裴磊%冉多良%陳化蘭
왕염려%리준휘%강영평%하준%배뢰%염다량%진화란
重组禽痘病毒%绿色荧光蛋白%黄嘌呤鸟嘌呤磷酸转移酶%HA基因
重組禽痘病毒%綠色熒光蛋白%黃嘌呤鳥嘌呤燐痠轉移酶%HA基因
중조금두병독%록색형광단백%황표령조표령린산전이매%HA기인
为研制和开发以禽痘病毒为载体的重组病毒疫苗,本研究构建了禽痘病毒通用转移载体pSY681-gfp-gpt,该载体含有gfp和gpt2种报告基因及背对的痘苗病毒晚期启动子P11和早期启动子P7.5,P11启动gfp和gpt两个基因,P7.5用于启动外源基因,在早期启动子P7.5下游引入NotⅡ和AftⅡ两个酶切位点.用于外源基因的插入.为检测禽痘病毒转移载体pSY681-gfp-gpt的有效性,将H9亚型禽流感病毒A/Chicken/Shanghai/10/01(H9N2)的HA基因插入到该载体中构建转移载体pSY681-gfp-gpt-HA9,将转移载体转染已感染禽痘病毒S-FPV-017的鸡胚成纤维细胞,利用gfp和gpt同时进行双重筛选、数轮蚀斑纯化后获得了重组病毒rFPV-gpt-gfp-HA9,通过PCR、western blot鉴定,结果证明,获得了能稳定表达H9亚型禽流感病毒HA蛋白的重组禽痘病毒rFPV-gpt-gfp-HA9,为今后重组禽痘病毒活载体疫苗的研制奠定了基础.
為研製和開髮以禽痘病毒為載體的重組病毒疫苗,本研究構建瞭禽痘病毒通用轉移載體pSY681-gfp-gpt,該載體含有gfp和gpt2種報告基因及揹對的痘苗病毒晚期啟動子P11和早期啟動子P7.5,P11啟動gfp和gpt兩箇基因,P7.5用于啟動外源基因,在早期啟動子P7.5下遊引入NotⅡ和AftⅡ兩箇酶切位點.用于外源基因的插入.為檢測禽痘病毒轉移載體pSY681-gfp-gpt的有效性,將H9亞型禽流感病毒A/Chicken/Shanghai/10/01(H9N2)的HA基因插入到該載體中構建轉移載體pSY681-gfp-gpt-HA9,將轉移載體轉染已感染禽痘病毒S-FPV-017的鷄胚成纖維細胞,利用gfp和gpt同時進行雙重篩選、數輪蝕斑純化後穫得瞭重組病毒rFPV-gpt-gfp-HA9,通過PCR、western blot鑒定,結果證明,穫得瞭能穩定錶達H9亞型禽流感病毒HA蛋白的重組禽痘病毒rFPV-gpt-gfp-HA9,為今後重組禽痘病毒活載體疫苗的研製奠定瞭基礎.
위연제화개발이금두병독위재체적중조병독역묘,본연구구건료금두병독통용전이재체pSY681-gfp-gpt,해재체함유gfp화gpt2충보고기인급배대적두묘병독만기계동자P11화조기계동자P7.5,P11계동gfp화gpt량개기인,P7.5용우계동외원기인,재조기계동자P7.5하유인입NotⅡ화AftⅡ량개매절위점.용우외원기인적삽입.위검측금두병독전이재체pSY681-gfp-gpt적유효성,장H9아형금류감병독A/Chicken/Shanghai/10/01(H9N2)적HA기인삽입도해재체중구건전이재체pSY681-gfp-gpt-HA9,장전이재체전염이감염금두병독S-FPV-017적계배성섬유세포,이용gfp화gpt동시진행쌍중사선、수륜식반순화후획득료중조병독rFPV-gpt-gfp-HA9,통과PCR、western blot감정,결과증명,획득료능은정표체H9아형금류감병독HA단백적중조금두병독rFPV-gpt-gfp-HA9,위금후중조금두병독활재체역묘적연제전정료기출.
