中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2010年
11期
2180-2184
,共5页
李子俊%刘于保%李东风%秦玉璇%李保朋%马艳红%刘强%梁长虹
李子俊%劉于保%李東風%秦玉璇%李保朋%馬豔紅%劉彊%樑長虹
리자준%류우보%리동풍%진옥선%리보붕%마염홍%류강%량장홍
双顺反子腺病毒载体%肌酸激酶%白细胞介素12%原代肝细胞
雙順反子腺病毒載體%肌痠激酶%白細胞介素12%原代肝細胞
쌍순반자선병독재체%기산격매%백세포개소12%원대간세포
目的:构建含肌酸激酶(CK)基因和人白细胞介素12(hIL-12)基因的双顺反子重组腺病毒载体pDC316-hIL-12-IRES-CKb,并包装成重组腺病毒,检测其在肝细胞中蛋白表达和肝脏中磷酸肌酸的水平.方法:将PCR 扩增的产物CK片段和hIL-12片段顺次插入双顺反子腺病毒载体(IES)中,经同源重组、包装和扩增获得重组腺病毒子.再用该病毒感染体外培养的兔肝细胞,经Western blotting检测到 CK 蛋白的表达和ELISA检测培养液中hIL-12水平.结果:体外实验在感染肝细胞后检测到CK和hIL-12蛋白的表达;同时体内实验应用核磁共振波谱(MRS)的方法能检测到肝脏特异性CK产物磷酸肌酸的水平.结论:携带CK和hIL-12基因的双顺反子重组腺病毒能使CK 基因异源性地表达在肝脏并能用非侵袭性的MRS技术检测其表达.此载体的构建为进一步研究CK基因作为一个影像报告基因动态监测肝脏治疗基因hIL-12的表达奠定基础.
目的:構建含肌痠激酶(CK)基因和人白細胞介素12(hIL-12)基因的雙順反子重組腺病毒載體pDC316-hIL-12-IRES-CKb,併包裝成重組腺病毒,檢測其在肝細胞中蛋白錶達和肝髒中燐痠肌痠的水平.方法:將PCR 擴增的產物CK片段和hIL-12片段順次插入雙順反子腺病毒載體(IES)中,經同源重組、包裝和擴增穫得重組腺病毒子.再用該病毒感染體外培養的兔肝細胞,經Western blotting檢測到 CK 蛋白的錶達和ELISA檢測培養液中hIL-12水平.結果:體外實驗在感染肝細胞後檢測到CK和hIL-12蛋白的錶達;同時體內實驗應用覈磁共振波譜(MRS)的方法能檢測到肝髒特異性CK產物燐痠肌痠的水平.結論:攜帶CK和hIL-12基因的雙順反子重組腺病毒能使CK 基因異源性地錶達在肝髒併能用非侵襲性的MRS技術檢測其錶達.此載體的構建為進一步研究CK基因作為一箇影像報告基因動態鑑測肝髒治療基因hIL-12的錶達奠定基礎.
목적:구건함기산격매(CK)기인화인백세포개소12(hIL-12)기인적쌍순반자중조선병독재체pDC316-hIL-12-IRES-CKb,병포장성중조선병독,검측기재간세포중단백표체화간장중린산기산적수평.방법:장PCR 확증적산물CK편단화hIL-12편단순차삽입쌍순반자선병독재체(IES)중,경동원중조、포장화확증획득중조선병독자.재용해병독감염체외배양적토간세포,경Western blotting검측도 CK 단백적표체화ELISA검측배양액중hIL-12수평.결과:체외실험재감염간세포후검측도CK화hIL-12단백적표체;동시체내실험응용핵자공진파보(MRS)적방법능검측도간장특이성CK산물린산기산적수평.결론:휴대CK화hIL-12기인적쌍순반자중조선병독능사CK 기인이원성지표체재간장병능용비침습성적MRS기술검측기표체.차재체적구건위진일보연구CK기인작위일개영상보고기인동태감측간장치료기인hIL-12적표체전정기출.
