CAJ | 학술논문

本研究旨在研究布鲁菌糖基转移酶(WboA)在诱发胚胎滋养层细胞(HTP-8)炎症反应中的作用.以羊种布鲁菌M5-90为模板,扩增WboA基因,构建pET28a(+)-WboA重组表达质粒,转化重组质粒在BL21(DE3)中表达,通过SDS-PAGE和Western blot鉴定,并对重组WboA蛋白进行纯化.构建自杀载体pGEM-7zf-△WboA-SacB,通过同源重组的方法,筛选布鲁菌WboA基因缺失株△WboA,并进行PCR鉴定和遗传稳定性检测.然后将纯化的WboA蛋白与△WboA分别作用于胚胎滋养层细胞,ELISA检测IL-6、IL-10、TNF-α和乳酸脱氢酶(LDH)的相对变化量.结果成功纯化了WboA蛋白,构建了△WboA,△WboA侵染胚胎滋养层细胞诱导产生炎症细胞因子IL-6、IL-10和TNF-α均低于M5-90对照组,差异显著(P＜0.05),WboA蛋白作用胚胎滋养层细胞时,炎症细胞因子IL-6、TNF-α和LDH均高于PBS对照组,差异极显著(P＜0.01).本研究表明WboA蛋白具有细胞毒作用,布鲁菌的致炎作用与脂多糖O链相关,为进一步阐明布鲁菌感染宿主细胞的发病机制奠定了基础.
본연구지재연구포로균당기전이매(WboA)재유발배태자양층세포(HTP-8)염증반응중적작용.이양충포로균M5-90위모판,확증WboA기인,구건pET28a(+)-WboA중조표체질립,전화중조질립재BL21(DE3)중표체,통과SDS-PAGE화Western blot감정,병대중조WboA단백진행순화.구건자살재체pGEM-7zf-△WboA-SacB,통과동원중조적방법,사선포로균WboA기인결실주△WboA,병진행PCR감정화유전은정성검측.연후장순화적WboA단백여△WboA분별작용우배태자양층세포,ELISA검측IL-6、IL-10、TNF-α화유산탈경매(LDH)적상대변화량.결과성공순화료WboA단백,구건료△WboA,△WboA침염배태자양층세포유도산생염증세포인자IL-6、IL-10화TNF-α균저우M5-90대조조,차이현저(P＜0.05),WboA단백작용배태자양층세포시,염증세포인자IL-6、TNF-α화LDH균고우PBS대조조,차이겁현저(P＜0.01).본연구표명WboA단백구유세포독작용,포로균적치염작용여지다당O련상관,위진일보천명포로균감염숙주세포적발병궤제전정료기출.