CAJ | 학술논문

目的为了研究新发现的人epsilon干扰素(hIFN-ε)的生物学活性,我们通过RT-PCR克隆了hIFN-ε基因,并构建pcDNA3.1/myc-his(-)A-hIFN-ε(以下简称pcDNA3.1A-hIFN-ε)的真核表达载体,在CHO细胞中表达,并研究真核细胞重组表达的rhIFN-ε的生物学活性.方法用TNF-α刺激人宫颈癌HeLa细胞,抽提总RNA,经RT-PCR获得全长cDNA,与pcDNA3.1/myc-his(-)A真核表达载体连接,构建重组体pcDNA3.1A-hIFN-ε,并在CHO细胞中进行表达,采用微量细胞病变抑制试验研究表达产物中的rhIFN-ε对多种病毒的抗病毒活性;MTT法检测其对A375、HeLa和A549细胞的生长影响,并通过在Wish、HeLa、A375细胞中诱导MxA抗病毒蛋白的产生研究hIFN-ε的抗病毒机制.结果经PCR和限制性酶切鉴定以及DNA测序,结果表明已经成功构建了重组体pcDNA3.1A-hIFN-ε,并在CHO细胞中稳定表达了rhIFN-ε蛋白,该蛋白具有抗HSV-Ⅰ、PolioV、Ad3和VSV病毒的作用,能够抑制HeLa、A375、A549细胞的生长,刺激Wish、HeLa、A375细胞产生MxA蛋白.结论本研究成功地构建了pcDNA3.1A-hIFN-ε真核表达载体并在CHO细胞中获得稳定表达,证明了rhIFN-ε蛋白具有抗病毒和抗增殖活性,其抗病毒效应的分子机理可能与诱导细胞产生MxA抗病毒蛋白有关,为今后研究rhIFN-ε的生物学功能和基因重组药物研制及其开展基因治疗奠定了基础.
목적위료연구신발현적인epsilon간우소(hIFN-ε)적생물학활성,아문통과RT-PCR극륭료hIFN-ε기인,병구건pcDNA3.1/myc-his(-)A-hIFN-ε(이하간칭pcDNA3.1A-hIFN-ε)적진핵표체재체,재CHO세포중표체,병연구진핵세포중조표체적rhIFN-ε적생물학활성.방법용TNF-α자격인궁경암HeLa세포,추제총RNA,경RT-PCR획득전장cDNA,여pcDNA3.1/myc-his(-)A진핵표체재체련접,구건중조체pcDNA3.1A-hIFN-ε,병재CHO세포중진행표체,채용미량세포병변억제시험연구표체산물중적rhIFN-ε대다충병독적항병독활성;MTT법검측기대A375、HeLa화A549세포적생장영향,병통과재Wish、HeLa、A375세포중유도MxA항병독단백적산생연구hIFN-ε적항병독궤제.결과경PCR화한제성매절감정이급DNA측서,결과표명이경성공구건료중조체pcDNA3.1A-hIFN-ε,병재CHO세포중은정표체료rhIFN-ε단백,해단백구유항HSV-Ⅰ、PolioV、Ad3화VSV병독적작용,능구억제HeLa、A375、A549세포적생장,자격Wish、HeLa、A375세포산생MxA단백.결론본연구성공지구건료pcDNA3.1A-hIFN-ε진핵표체재체병재CHO세포중획득은정표체,증명료rhIFN-ε단백구유항병독화항증식활성,기항병독효응적분자궤리가능여유도세포산생MxA항병독단백유관,위금후연구rhIFN-ε적생물학공능화기인중조약물연제급기개전기인치료전정료기출.