中华肿瘤杂志
中華腫瘤雜誌
중화종류잡지
CHINESE JOURNAL OF ONCOLOGY
2007年
9期
670-675
,共6页
刘叶%丁佳逸%沈炜亮%赵兴%范顺武
劉葉%丁佳逸%瀋煒亮%趙興%範順武
류협%정가일%침위량%조흥%범순무
siRNA%cyclin A2%G0/G1期阻滞%MG-63细胞
siRNA%cyclin A2%G0/G1期阻滯%MG-63細胞
siRNA%cyclin A2%G0/G1기조체%MG-63세포
目的 利用小干扰RNA(siRNA)抑制骨肉瘤及正常成纤维细胞中cyclin A2基因的表达,并观察其对细胞生物活性的影响.方法 设计并化学合成3对针对cyclin A2基因的siRNA,用Oligofectamine分别将其转染到骨肉瘤细胞系MG-63及正常人成纤维细胞HSF中,以无义siRNA转染作为阴性对照;以real-time PCR、Western blot检测cyclin A2基因沉默效果,采用MTT、RT-PCR、流式细胞、克隆培养等方法评价抑制cyclin A2基因表达后细胞的生长状态,同时检测PCNA及cyclin B1表达的改变.结果 3对siRNA均能使cyclin A2 mRNA的表达降低,其中siRNA1抑制率最高.在骨肉瘤细胞MG-63中,转染50 nmol/L的siRNA1 48 h后,cyclin A2的mRNA及蛋白表达被抑制近80%,这导致细胞增殖抑制,80.1%的细胞被阻滞在G0/G1期,克隆形成能力下降至45.5%,同时,PCNA及cyclin B1的mRNA表达明显降低.对正常成纤维细胞HSF,虽然siRNA1能抑制近60%的cyclin A2 mRNA及蛋白表达,但细胞的增殖及克隆形成能力未受影响.结论 针对cyclin A2基因的siRNA能有效降低细胞中cyclin A2 mRNA及蛋白的表达,抑制骨肉瘤细胞的生长,而对正常细胞影响不大.表明cyclin A2是骨肉瘤细胞增殖所依赖的关键基因,抑制其表达有望成为治疗骨肉瘤的新途径.
目的 利用小榦擾RNA(siRNA)抑製骨肉瘤及正常成纖維細胞中cyclin A2基因的錶達,併觀察其對細胞生物活性的影響.方法 設計併化學閤成3對針對cyclin A2基因的siRNA,用Oligofectamine分彆將其轉染到骨肉瘤細胞繫MG-63及正常人成纖維細胞HSF中,以無義siRNA轉染作為陰性對照;以real-time PCR、Western blot檢測cyclin A2基因沉默效果,採用MTT、RT-PCR、流式細胞、剋隆培養等方法評價抑製cyclin A2基因錶達後細胞的生長狀態,同時檢測PCNA及cyclin B1錶達的改變.結果 3對siRNA均能使cyclin A2 mRNA的錶達降低,其中siRNA1抑製率最高.在骨肉瘤細胞MG-63中,轉染50 nmol/L的siRNA1 48 h後,cyclin A2的mRNA及蛋白錶達被抑製近80%,這導緻細胞增殖抑製,80.1%的細胞被阻滯在G0/G1期,剋隆形成能力下降至45.5%,同時,PCNA及cyclin B1的mRNA錶達明顯降低.對正常成纖維細胞HSF,雖然siRNA1能抑製近60%的cyclin A2 mRNA及蛋白錶達,但細胞的增殖及剋隆形成能力未受影響.結論 針對cyclin A2基因的siRNA能有效降低細胞中cyclin A2 mRNA及蛋白的錶達,抑製骨肉瘤細胞的生長,而對正常細胞影響不大.錶明cyclin A2是骨肉瘤細胞增殖所依賴的關鍵基因,抑製其錶達有望成為治療骨肉瘤的新途徑.
목적 이용소간우RNA(siRNA)억제골육류급정상성섬유세포중cyclin A2기인적표체,병관찰기대세포생물활성적영향.방법 설계병화학합성3대침대cyclin A2기인적siRNA,용Oligofectamine분별장기전염도골육류세포계MG-63급정상인성섬유세포HSF중,이무의siRNA전염작위음성대조;이real-time PCR、Western blot검측cyclin A2기인침묵효과,채용MTT、RT-PCR、류식세포、극륭배양등방법평개억제cyclin A2기인표체후세포적생장상태,동시검측PCNA급cyclin B1표체적개변.결과 3대siRNA균능사cyclin A2 mRNA적표체강저,기중siRNA1억제솔최고.재골육류세포MG-63중,전염50 nmol/L적siRNA1 48 h후,cyclin A2적mRNA급단백표체피억제근80%,저도치세포증식억제,80.1%적세포피조체재G0/G1기,극륭형성능력하강지45.5%,동시,PCNA급cyclin B1적mRNA표체명현강저.대정상성섬유세포HSF,수연siRNA1능억제근60%적cyclin A2 mRNA급단백표체,단세포적증식급극륭형성능력미수영향.결론 침대cyclin A2기인적siRNA능유효강저세포중cyclin A2 mRNA급단백적표체,억제골육류세포적생장,이대정상세포영향불대.표명cyclin A2시골육류세포증식소의뢰적관건기인,억제기표체유망성위치료골육류적신도경.
