CAJ | 학술논문

目的研究应用载体介导的RNA干涉技术特异性干扰Raf-1基因在鼻咽癌细胞株HNE1中的表达以及对其生物学行为的影响.方法构建利用U6启动子转录功能的shRNA的载体,在U6启动子下游分别插入含针对Raf-1基因不同位点的特异性RNA干扰序列-67 bp寡核苷酸片段,并编号命名为:pshuttle-Raf-1-a(225),pshattle-Raf-1-b(358)和pshuttle-Raf-1-c(474).将构建的质粒通过脂质体转染人鼻咽癌细胞株HNE1,用 RT-PCR分析Raf-1基因的mRNA的表达,流式细胞仪检测转染后HNE1细胞的凋亡率.结果 3种含有针对Raf-1基因不同特异性序列的质粒转染后均能干扰该基因在HNE1细胞中的表达,其中以pSIREN shuttle-Raf-1-b(358)作用最为明显.RT-PCR检测Raf-1基因mRNA表达量下降,流式细胞仪检测细胞凋亡率增加,达到65%.结论应用载体介导的RNAi技术可特异性干扰Raf-1基因在鼻咽癌细胞HNE1中的表达,使该细胞凋亡率增加,Raf-1基因相对应的mRNA表达下降.
목적 연구응용재체개도적RNA간섭기술특이성간우Raf-1기인재비인암세포주HNE1중적표체이급대기생물학행위적영향.방법 구건이용U6계동자전록공능적shRNA적재체,재U6계동자하유분별삽입함침대Raf-1기인불동위점적특이성RNA간우서렬-67 bp과핵감산편단,병편호명명위:pshuttle-Raf-1-a(225),pshattle-Raf-1-b(358)화pshuttle-Raf-1-c(474).장구건적질립통과지질체전염인비인암세포주HNE1,용 RT-PCR분석Raf-1기인적mRNA적표체,류식세포의검측전염후HNE1세포적조망솔.결과 3충함유침대Raf-1기인불동특이성서렬적질립전염후균능간우해기인재HNE1세포중적표체,기중이pSIREN shuttle-Raf-1-b(358)작용최위명현.RT-PCR검측Raf-1기인mRNA표체량하강,류식세포의검측세포조망솔증가,체도65%.결론 응용재체개도적RNAi기술가특이성간우Raf-1기인재비인암세포HNE1중적표체,사해세포조망솔증가,Raf-1기인상대응적mRNA표체하강.