生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2012年
8期
125-129
,共5页
但晓雅%董英%邹明强%薛强%杜景娇
但曉雅%董英%鄒明彊%薛彊%杜景嬌
단효아%동영%추명강%설강%두경교
H9亚型禽流感病毒%逆转录环介导等温扩增%快速检测%实时
H9亞型禽流感病毒%逆轉錄環介導等溫擴增%快速檢測%實時
H9아형금류감병독%역전록배개도등온확증%쾌속검측%실시
利用改良逆转录环介导等温扩增( RT-LAMP)技术建立一种快速、灵敏的检测方法用于H9亚型禽流感病毒检测.根据H9亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因保守区序列中的8个区段设计6条特异性引物,在恒温条件下进行核酸扩增反应,并以琼脂糖凝胶电泳和目视检查绿色荧光两种方法对扩增结果进行判定.结果表明,RT-LAMP的最小检测限为100fg,灵敏度比PTPCR高100倍,且与H5亚型、H7亚型禽流感病毒,新城疫病毒(NDV)无交叉反应.目视检查绿色荧光与常规琼脂糖凝胶电泳的判定结果一致.整个扩增检测过程在35 min内即可完成.利用临床样本对RT-LAMP法进行验证,结果与RT-PCR一致.由实时浊度分析得到的标准曲线,计算出临床样本中的病毒质粒拷贝数均在2×107-2×104之间.因此,本研究建立的RT-LAMP方法快速、灵敏、特异性强,是H9亚型禽流感病毒的一种高效检测方法.
利用改良逆轉錄環介導等溫擴增( RT-LAMP)技術建立一種快速、靈敏的檢測方法用于H9亞型禽流感病毒檢測.根據H9亞型禽流感病毒血凝素(HA)基因保守區序列中的8箇區段設計6條特異性引物,在恆溫條件下進行覈痠擴增反應,併以瓊脂糖凝膠電泳和目視檢查綠色熒光兩種方法對擴增結果進行判定.結果錶明,RT-LAMP的最小檢測限為100fg,靈敏度比PTPCR高100倍,且與H5亞型、H7亞型禽流感病毒,新城疫病毒(NDV)無交扠反應.目視檢查綠色熒光與常規瓊脂糖凝膠電泳的判定結果一緻.整箇擴增檢測過程在35 min內即可完成.利用臨床樣本對RT-LAMP法進行驗證,結果與RT-PCR一緻.由實時濁度分析得到的標準麯線,計算齣臨床樣本中的病毒質粒拷貝數均在2×107-2×104之間.因此,本研究建立的RT-LAMP方法快速、靈敏、特異性彊,是H9亞型禽流感病毒的一種高效檢測方法.
이용개량역전록배개도등온확증( RT-LAMP)기술건립일충쾌속、령민적검측방법용우H9아형금류감병독검측.근거H9아형금류감병독혈응소(HA)기인보수구서렬중적8개구단설계6조특이성인물,재항온조건하진행핵산확증반응,병이경지당응효전영화목시검사록색형광량충방법대확증결과진행판정.결과표명,RT-LAMP적최소검측한위100fg,령민도비PTPCR고100배,차여H5아형、H7아형금류감병독,신성역병독(NDV)무교차반응.목시검사록색형광여상규경지당응효전영적판정결과일치.정개확증검측과정재35 min내즉가완성.이용림상양본대RT-LAMP법진행험증,결과여RT-PCR일치.유실시탁도분석득도적표준곡선,계산출림상양본중적병독질립고패수균재2×107-2×104지간.인차,본연구건립적RT-LAMP방법쾌속、령민、특이성강,시H9아형금류감병독적일충고효검측방법.
