CAJ | 학술논문

目的:探讨手足口病病原体EV71病毒的分离方法.方法:取手足口病患儿的粪便,经磷酸盐缓冲液(PBS)稀释后用0.22 μm滤膜过滤,将悬液接种于Vero细胞.通过EV71病毒致细胞病变效应(CPE)分析、电镜分析、EV71病毒特异性核酸及蛋白的聚合酶链反应(PCR)及Western Blotting分析来鉴定病毒分离和致病效果.检测病毒悬液对于宿主细胞Vero增殖抑制的效果.结果:标本悬液接种Vero细胞48 h后出现CPE.收集感染细胞的培养基上清液,连续感染2次,均出现同样的CPE.电镜检测发现在感染组Vero细胞的细胞质和细胞核周围均有大量聚集的病毒颗粒.EV71特异性核酸RT-PCR检测证实,感染组Vero细胞中可以扩增出EV71病毒特异性的核酸条带.Western Blotting检测发现,在感染组细胞中有高表达EV71特异性抗原蛋白,而未感染组细胞不表达该病毒抗原.MTT检测结果显示,EV71病毒显著抑制宿主细胞Vero的体外增殖和生长,并且呈时间依赖性.结论:成功分离出人手足口病致微生物EV71病毒株(该EV71病毒株编号为EV71-Tj-100623).
목적:탐토수족구병병원체EV71병독적분리방법.방법:취수족구병환인적분편,경린산염완충액(PBS)희석후용0.22 μm려막과려,장현액접충우Vero세포.통과EV71병독치세포병변효응(CPE)분석、전경분석、EV71병독특이성핵산급단백적취합매련반응(PCR)급Western Blotting분석래감정병독분리화치병효과.검측병독현액대우숙주세포Vero증식억제적효과.결과:표본현액접충Vero세포48 h후출현CPE.수집감염세포적배양기상청액,련속감염2차,균출현동양적CPE.전경검측발현재감염조Vero세포적세포질화세포핵주위균유대량취집적병독과립.EV71특이성핵산RT-PCR검측증실,감염조Vero세포중가이확증출EV71병독특이성적핵산조대.Western Blotting검측발현,재감염조세포중유고표체EV71특이성항원단백,이미감염조세포불표체해병독항원.MTT검측결과현시,EV71병독현저억제숙주세포Vero적체외증식화생장,병차정시간의뢰성.결론:성공분리출인수족구병치미생물EV71병독주(해EV71병독주편호위EV71-Tj-100623).