中国医药生物技术
中國醫藥生物技術
중국의약생물기술
CHINESE MEDICINAL BIOTECHNOLOGY
2011年
1期
7-11
,共5页
刘广鹏%孙剑%李宇琳%周恒%崔磊
劉廣鵬%孫劍%李宇琳%週恆%崔磊
류엄붕%손검%리우림%주항%최뢰
低温保存%绿色荧光蛋白质类%组织工程%成体干细胞%动物实验
低溫保存%綠色熒光蛋白質類%組織工程%成體榦細胞%動物實驗
저온보존%록색형광단백질류%조직공정%성체간세포%동물실험
目的 研究经低温保存的GFP基因转染的犬脂肪源性干细胞(ASCs)在脱钙骨(DBM)支架材料上的生长特性及成骨分化潜能.方法 胶原酶消化法分离获取并常规培养犬ASCs,用绿色荧光蛋白(GFP)重组逆转录病毒载体转染第2代ASCs,然后进行低温保存.-196℃液氮保存4周后,37℃复苏,测定细胞存活率.低温保存前后的ASCs接种DBM,用成骨诱导液诱导培养2周.激光共聚焦显微镜观察细胞在DBM上的生长情况,DNA定量(Hoechst33258法)测定细胞的体外增殖活性.通过测定碱性磷酸酶(ALP)活性和骨钙蛋白(OCN)含量,观察低温冻存对细胞在支架材料上成骨能力的影响.结果 低温冻存复苏后细胞的存活率＞90%,激光共聚焦显微镜显示细胞在材料上黏附生长良好.体外培养12 d时细胞增殖达到平台期,ALP活性与OCN含量则随培养时间延长而不断上升,低温保存前后细胞的检测结果无显著差异(P＞0.05).结论 低温保存对GFP标记的犬ASCs在脱钙骨上的体外生长及成骨能力无显著影响,可以作为组织工程骨的种子细胞.
目的 研究經低溫保存的GFP基因轉染的犬脂肪源性榦細胞(ASCs)在脫鈣骨(DBM)支架材料上的生長特性及成骨分化潛能.方法 膠原酶消化法分離穫取併常規培養犬ASCs,用綠色熒光蛋白(GFP)重組逆轉錄病毒載體轉染第2代ASCs,然後進行低溫保存.-196℃液氮保存4週後,37℃複囌,測定細胞存活率.低溫保存前後的ASCs接種DBM,用成骨誘導液誘導培養2週.激光共聚焦顯微鏡觀察細胞在DBM上的生長情況,DNA定量(Hoechst33258法)測定細胞的體外增殖活性.通過測定堿性燐痠酶(ALP)活性和骨鈣蛋白(OCN)含量,觀察低溫凍存對細胞在支架材料上成骨能力的影響.結果 低溫凍存複囌後細胞的存活率＞90%,激光共聚焦顯微鏡顯示細胞在材料上黏附生長良好.體外培養12 d時細胞增殖達到平檯期,ALP活性與OCN含量則隨培養時間延長而不斷上升,低溫保存前後細胞的檢測結果無顯著差異(P＞0.05).結論 低溫保存對GFP標記的犬ASCs在脫鈣骨上的體外生長及成骨能力無顯著影響,可以作為組織工程骨的種子細胞.
목적 연구경저온보존적GFP기인전염적견지방원성간세포(ASCs)재탈개골(DBM)지가재료상적생장특성급성골분화잠능.방법 효원매소화법분리획취병상규배양견ASCs,용록색형광단백(GFP)중조역전록병독재체전염제2대ASCs,연후진행저온보존.-196℃액담보존4주후,37℃복소,측정세포존활솔.저온보존전후적ASCs접충DBM,용성골유도액유도배양2주.격광공취초현미경관찰세포재DBM상적생장정황,DNA정량(Hoechst33258법)측정세포적체외증식활성.통과측정감성린산매(ALP)활성화골개단백(OCN)함량,관찰저온동존대세포재지가재료상성골능력적영향.결과 저온동존복소후세포적존활솔＞90%,격광공취초현미경현시세포재재료상점부생장량호.체외배양12 d시세포증식체도평태기,ALP활성여OCN함량칙수배양시간연장이불단상승,저온보존전후세포적검측결과무현저차이(P＞0.05).결론 저온보존대GFP표기적견ASCs재탈개골상적체외생장급성골능력무현저영향,가이작위조직공정골적충자세포.
