中国畜牧兽医
中國畜牧獸醫
중국축목수의
CHINA ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2010年
12期
68-73
,共6页
向毅勇%罗薇%靳艳玲%刘内生%刘群%龙虎
嚮毅勇%囉薇%靳豔玲%劉內生%劉群%龍虎
향의용%라미%근염령%류내생%류군%룡호
鸭肝炎%原核表达%SDS-PAGE%Western blotting
鴨肝炎%原覈錶達%SDS-PAGE%Western blotting
압간염%원핵표체%SDS-PAGE%Western blotting
应用巢氏PCR(nested-PCR)扩增出1型鸭肝炎病毒鸡胚化弱毒MY株结构蛋白VP1基因片段,将VP1克隆到pMD18-T载体上,测序结果为714 bp,GenBank登录号:GU363950.对MY株VP1基因编码蛋白的主要抗原位点进行预测,aa208-aa222氨基酸区段表现很高的亲水性、抗原指数和表面可及性.VP1经EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切后克隆至pET32a(+)原核表达载体,获得重组质粒pET-VP1,转入BL21 PLyss(DE3)细胞中,IPTG诱导后SDS-PAGE检测结果表明,在大肠杆菌中表达了1个相对分子质量为47 ku的融合蛋白.Western blotting分析结果表明,该重组蛋白可与鸭肝炎标准阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应原性.
應用巢氏PCR(nested-PCR)擴增齣1型鴨肝炎病毒鷄胚化弱毒MY株結構蛋白VP1基因片段,將VP1剋隆到pMD18-T載體上,測序結果為714 bp,GenBank登錄號:GU363950.對MY株VP1基因編碼蛋白的主要抗原位點進行預測,aa208-aa222氨基痠區段錶現很高的親水性、抗原指數和錶麵可及性.VP1經EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ雙酶切後剋隆至pET32a(+)原覈錶達載體,穫得重組質粒pET-VP1,轉入BL21 PLyss(DE3)細胞中,IPTG誘導後SDS-PAGE檢測結果錶明,在大腸桿菌中錶達瞭1箇相對分子質量為47 ku的融閤蛋白.Western blotting分析結果錶明,該重組蛋白可與鴨肝炎標準暘性血清髮生特異性反應,具有良好的反應原性.
응용소씨PCR(nested-PCR)확증출1형압간염병독계배화약독MY주결구단백VP1기인편단,장VP1극륭도pMD18-T재체상,측서결과위714 bp,GenBank등록호:GU363950.대MY주VP1기인편마단백적주요항원위점진행예측,aa208-aa222안기산구단표현흔고적친수성、항원지수화표면가급성.VP1경EcoR Ⅰ화Xho Ⅰ쌍매절후극륭지pET32a(+)원핵표체재체,획득중조질립pET-VP1,전입BL21 PLyss(DE3)세포중,IPTG유도후SDS-PAGE검측결과표명,재대장간균중표체료1개상대분자질량위47 ku적융합단백.Western blotting분석결과표명,해중조단백가여압간염표준양성혈청발생특이성반응,구유량호적반응원성.
