中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2010年
46期
8604-8607
,共4页
郑水长%高仕长%倪卫东%梁安霖
鄭水長%高仕長%倪衛東%樑安霖
정수장%고사장%예위동%량안림
胰岛素样生长因子1%α-肌动蛋白%生长激素%基因重组%转染
胰島素樣生長因子1%α-肌動蛋白%生長激素%基因重組%轉染
이도소양생장인자1%α-기동단백%생장격소%기인중조%전염
背景:骨骼肌肌萎缩的治疗一直是基础和临床研究的难点和热点之一,近年来基因治疗在该领域得到了广泛的研究和关注.目的:拟构建携带大鼠骨骼肌α-肌动蛋白/人胰岛素样生长因子1(rat skeletal α-actin/human insulin-like growth factor-1,RSKA/hlGF-1)杂交基因的重组真核表达质粒,并观察其在C2C12细胞内表达.方法:登录Genbank数据库,查找RSKA启动子序列、hIGF-1 cDNA序列和人生长激素3'尾端非编码区序列(3'UTR),把3段基因序列拼接后进行全基因合成,再将合成的全基因融合到PbluescriptⅡSK(+)[PBS]质粒上.用酶切电泳及测序检查质粒重组后序列的正确性;重组质粒转染C2C12细胞,应用RT-PCR和Western blot法分别鉴定转染细胞中hlGF-1 mRNA和蛋白的表达.结果与结论:重组质粒PBS-RSKA/hIGF-1酶切图谱与预期相同,测序验证插入片段全序列无改变.转染C2C12细胞后,RT-PCR及Western blot结果显示有特异条带出现,且差异明显.结果证明成功构建携RSKA/hlGF-1杂交基因的重组质粒,并在C2C12细胞中正确表达.
揹景:骨骼肌肌萎縮的治療一直是基礎和臨床研究的難點和熱點之一,近年來基因治療在該領域得到瞭廣汎的研究和關註.目的:擬構建攜帶大鼠骨骼肌α-肌動蛋白/人胰島素樣生長因子1(rat skeletal α-actin/human insulin-like growth factor-1,RSKA/hlGF-1)雜交基因的重組真覈錶達質粒,併觀察其在C2C12細胞內錶達.方法:登錄Genbank數據庫,查找RSKA啟動子序列、hIGF-1 cDNA序列和人生長激素3'尾耑非編碼區序列(3'UTR),把3段基因序列拼接後進行全基因閤成,再將閤成的全基因融閤到PbluescriptⅡSK(+)[PBS]質粒上.用酶切電泳及測序檢查質粒重組後序列的正確性;重組質粒轉染C2C12細胞,應用RT-PCR和Western blot法分彆鑒定轉染細胞中hlGF-1 mRNA和蛋白的錶達.結果與結論:重組質粒PBS-RSKA/hIGF-1酶切圖譜與預期相同,測序驗證插入片段全序列無改變.轉染C2C12細胞後,RT-PCR及Western blot結果顯示有特異條帶齣現,且差異明顯.結果證明成功構建攜RSKA/hlGF-1雜交基因的重組質粒,併在C2C12細胞中正確錶達.
배경:골격기기위축적치료일직시기출화림상연구적난점화열점지일,근년래기인치료재해영역득도료엄범적연구화관주.목적:의구건휴대대서골격기α-기동단백/인이도소양생장인자1(rat skeletal α-actin/human insulin-like growth factor-1,RSKA/hlGF-1)잡교기인적중조진핵표체질립,병관찰기재C2C12세포내표체.방법:등록Genbank수거고,사조RSKA계동자서렬、hIGF-1 cDNA서렬화인생장격소3'미단비편마구서렬(3'UTR),파3단기인서렬병접후진행전기인합성,재장합성적전기인융합도PbluescriptⅡSK(+)[PBS]질립상.용매절전영급측서검사질립중조후서렬적정학성;중조질립전염C2C12세포,응용RT-PCR화Western blot법분별감정전염세포중hlGF-1 mRNA화단백적표체.결과여결론:중조질립PBS-RSKA/hIGF-1매절도보여예기상동,측서험증삽입편단전서렬무개변.전염C2C12세포후,RT-PCR급Western blot결과현시유특이조대출현,차차이명현.결과증명성공구건휴RSKA/hlGF-1잡교기인적중조질립,병재C2C12세포중정학표체.
