牙体牙髓牙周病学杂志
牙體牙髓牙週病學雜誌
아체아수아주병학잡지
CHINESE JOURNAL OF CONSERVATIVE DENTISTRY
2009年
5期
251-255
,共5页
韩婷婷%孙岩%张娟娟%刘晓影%官秀梅%高玉光
韓婷婷%孫巖%張娟娟%劉曉影%官秀梅%高玉光
한정정%손암%장연연%류효영%관수매%고옥광
转化生长因子-β1%基质金属蛋白酶-20%启动子%双荧光素酶报告系统
轉化生長因子-β1%基質金屬蛋白酶-20%啟動子%雙熒光素酶報告繫統
전화생장인자-β1%기질금속단백매-20%계동자%쌍형광소매보고계통
目的:克隆MMP-20基因启动子序列,分析转化生长因子-β1对其转录活性的影响.方法:检索并分析MMP-20基因翻译起始点上游序列.利用PCR从小鼠基因组上扩增长度为2852 bp的启动子序列,并与pMD18-T克隆载体连接.经酶切反应初步鉴定后,以pMD18-T-MMP-20为模板,利用PCR方法获得带酶切位点的MMP-20启动子片段(2842 bp),并与pGL3-Basic载体连接.pGL3-MMP-20瞬时转染小鼠成釉细胞系(ALC)过夜后,在培养基中加入1 ng/mL TGF-B1,12 h后检测荧光素酶的活性.结果:经酶切反应和测序结果证实MMP-20启动子成功插入pGL3-Basic质粒.与pGL3-Basic质粒转染相比较,转染pGL3-MMP-20后荧光素酶活性明显增强;培养基中加入TGF-β1能促使pGL3-MMP-20荧光素酶活性进一步增强.结论:外源性MMP-20启动子在成釉细胞中被激活;TGF-β1能增强pGL3-MMP-20荧光素酶活性,提示釉质发育过程中,TGF-β1具有调节MMP-20基因表达的生物学功能.
目的:剋隆MMP-20基因啟動子序列,分析轉化生長因子-β1對其轉錄活性的影響.方法:檢索併分析MMP-20基因翻譯起始點上遊序列.利用PCR從小鼠基因組上擴增長度為2852 bp的啟動子序列,併與pMD18-T剋隆載體連接.經酶切反應初步鑒定後,以pMD18-T-MMP-20為模闆,利用PCR方法穫得帶酶切位點的MMP-20啟動子片段(2842 bp),併與pGL3-Basic載體連接.pGL3-MMP-20瞬時轉染小鼠成釉細胞繫(ALC)過夜後,在培養基中加入1 ng/mL TGF-B1,12 h後檢測熒光素酶的活性.結果:經酶切反應和測序結果證實MMP-20啟動子成功插入pGL3-Basic質粒.與pGL3-Basic質粒轉染相比較,轉染pGL3-MMP-20後熒光素酶活性明顯增彊;培養基中加入TGF-β1能促使pGL3-MMP-20熒光素酶活性進一步增彊.結論:外源性MMP-20啟動子在成釉細胞中被激活;TGF-β1能增彊pGL3-MMP-20熒光素酶活性,提示釉質髮育過程中,TGF-β1具有調節MMP-20基因錶達的生物學功能.
목적:극륭MMP-20기인계동자서렬,분석전화생장인자-β1대기전록활성적영향.방법:검색병분석MMP-20기인번역기시점상유서렬.이용PCR종소서기인조상확증장도위2852 bp적계동자서렬,병여pMD18-T극륭재체련접.경매절반응초보감정후,이pMD18-T-MMP-20위모판,이용PCR방법획득대매절위점적MMP-20계동자편단(2842 bp),병여pGL3-Basic재체련접.pGL3-MMP-20순시전염소서성유세포계(ALC)과야후,재배양기중가입1 ng/mL TGF-B1,12 h후검측형광소매적활성.결과:경매절반응화측서결과증실MMP-20계동자성공삽입pGL3-Basic질립.여pGL3-Basic질립전염상비교,전염pGL3-MMP-20후형광소매활성명현증강;배양기중가입TGF-β1능촉사pGL3-MMP-20형광소매활성진일보증강.결론:외원성MMP-20계동자재성유세포중피격활;TGF-β1능증강pGL3-MMP-20형광소매활성,제시유질발육과정중,TGF-β1구유조절MMP-20기인표체적생물학공능.
