CAJ | 학술논문

根据GenBank中的参考序列设计并合成引物序列,从pMDM13h中扩增带酶切位点和His-tag的基因序列;用HindⅢ和Xho Ⅰ双酶切PCR扩增产物和pcDNA3.0栽体,连接构建真核表达重组质粒Pc3M13h,利用PCR,双酶切和测序鉴定其正确性;重组质粒pe3M13h转染COS-7细胞,瞬时表达的转染细胞(96孔板)在转染36～48 h后,应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验和免疫细胞化学,分别检测pc3M13h在COS-7细胞培养上清液和细胞内的表达.结果表明,设计合成的引物成功扩增了带有酶切位点和His-tag的基因序列;成功构建了真核表达重组质粒pe3M13,双抗体夹心酶联免疫吸附试验和免疫细胞化学检测显示,pc3M13h重组质粒不但能够在COS-7细胞中进行表达,而且能够进行微量的分泌表达.
근거GenBank중적삼고서렬설계병합성인물서렬,종pMDM13h중확증대매절위점화His-tag적기인서렬;용HindⅢ화Xho Ⅰ쌍매절PCR확증산물화pcDNA3.0재체,련접구건진핵표체중조질립Pc3M13h,이용PCR,쌍매절화측서감정기정학성;중조질립pe3M13h전염COS-7세포,순시표체적전염세포(96공판)재전염36～48 h후,응용쌍항체협심매련면역흡부시험화면역세포화학,분별검측pc3M13h재COS-7세포배양상청액화세포내적표체.결과표명,설계합성적인물성공확증료대유매절위점화His-tag적기인서렬;성공구건료진핵표체중조질립pe3M13,쌍항체협심매련면역흡부시험화면역세포화학검측현시,pc3M13h중조질립불단능구재COS-7세포중진행표체,이차능구진행미량적분비표체.