多头带绦虫TPx基因片段的克隆及原核表达
다두대조충TPx기인편단적극륭급원핵표체
Cloning and prokaryotic expression of thioredoxin peroxidase gene fragment of Taenia multiceps
  • 万方数据
    中国兽医科学 중국수의과학
    VETERINARY SCIENCE IN CHINA
    2009年 3期 251-256 ,共6页

    李永光%李文卉%李航%盖文燕%王鸿盛%姚菊霞%王艳华%张德林%贾万忠%Radu Biaga%付宝权

    리영광%리문훼%리항%개문연%왕홍성%요국하%왕염화%장덕림%가만충%Radu Biaga%부보권

    多头带绦虫%多头蚴%硫氧还蛋白过氧化物酶%重组蛋白%免疫原性 多頭帶縚蟲%多頭蚴%硫氧還蛋白過氧化物酶%重組蛋白%免疫原性
    다두대조충%다두유%류양환단백과양화물매%중조단백%면역원성
    从自然感染的病羊脑内采集多头蚴原头节,提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增多头带绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(TmTPx)基因片段,PCR产物连接到pMD18-T载体,转化至大肠杆菌DH5α后测序,发现克隆到的TmTPx基因片段开放阅读框为453 bp,编码150个氨基酸.对TmTPx基因片段进行限制性酶切后连接到表达载体pGEx-4T-1,构建重组表达质粒pGEX-4T-TmTPx,转化大肠杆菌DH5a后筛选阳性克隆,经限制性酶切分析、PCR及测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21,以IPTG进行诱导表达,用SDS-PAGE分析表达产物.结果显示,成功表达了大小约为43 ku的融合蛋白.对表达产物纯化后免疫家兔,采集血清用ELISA测定抗体效价,发现兔抗TmTPx重组蛋白的抗体能够与多头蚴原头节抗原发生特异性反应,说明该重组蛋白具有较好的免疫原性.
    종자연감염적병양뇌내채집다두유원두절,제취총RNA,채용RT-PCR기술확증다두대조충류양환단백과양화물매(TmTPx)기인편단,PCR산물련접도pMD18-T재체,전화지대장간균DH5α후측서,발현극륭도적TmTPx기인편단개방열독광위453 bp,편마150개안기산.대TmTPx기인편단진행한제성매절후련접도표체재체pGEx-4T-1,구건중조표체질립pGEX-4T-TmTPx,전화대장간균DH5a후사선양성극륭,경한제성매절분석、PCR급측서감정후,전화대장간균BL21,이IPTG진행유도표체,용SDS-PAGE분석표체산물.결과현시,성공표체료대소약위43 ku적융합단백.대표체산물순화후면역가토,채집혈청용ELISA측정항체효개,발현토항TmTPx중조단백적항체능구여다두유원두절항원발생특이성반응,설명해중조단백구유교호적면역원성.
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