西安交通大学学报（医学版）
西安交通大學學報（醫學版）
서안교통대학학보（의학판）
JOURNAL OF XI'AN JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2008年
6期
717-719,封4
,共4页
杨军%陈晓黎%苏宝山%王一理%司履生
楊軍%陳曉黎%囌寶山%王一理%司履生
양군%진효려%소보산%왕일리%사리생
增强型绿色荧光蛋白%宫颈癌%Hela细胞
增彊型綠色熒光蛋白%宮頸癌%Hela細胞
증강형록색형광단백%궁경암%Hela세포
目的 构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的Hela细胞系.方法 PCR和DNA测序鉴定pEGFP-C1真核表达质粒,采用Qiagen tip 500进行pEGFP-C1真核表达质粒DNA的提取和纯化;cellfectin转染Hela细胞,G418筛选,有限稀释法单克隆培养,荧光显微镜进行荧光检测EGFP的表达,采用激光共聚焦显微镜观测器检测荧光特性.结果 PCR和DNA测序证实pEGFP质粒结构正确;在倒置荧光显微镜下,转染24h后,部分Hela细胞可见绿色荧光,转染72h时,大约80% Hela细胞内均可见绿色荧光.加入含G418的选择性培养基进行选择性培养,选择荧光较强的Hela细胞经有限稀释,持续筛选及克隆化培养,获得稳定表达绿色荧光的Hela细胞克隆,扩大培养并传至10代以上,将此细胞株命名为Hela-EGFP.激光共聚焦显微镜观察发现:在蓝光 (-395nm)激发时,Hela-EGFP细胞绿色荧光激发波长为395nm,最大发射峰为509nm.结论 Hela-EGFP细胞株具备稳定表达EGFP的能力,为实时可视化进行宫颈癌侵袭转移机制的研究奠定了基础.
目的 構建增彊型綠色熒光蛋白(EGFP)標記的Hela細胞繫.方法 PCR和DNA測序鑒定pEGFP-C1真覈錶達質粒,採用Qiagen tip 500進行pEGFP-C1真覈錶達質粒DNA的提取和純化;cellfectin轉染Hela細胞,G418篩選,有限稀釋法單剋隆培養,熒光顯微鏡進行熒光檢測EGFP的錶達,採用激光共聚焦顯微鏡觀測器檢測熒光特性.結果 PCR和DNA測序證實pEGFP質粒結構正確;在倒置熒光顯微鏡下,轉染24h後,部分Hela細胞可見綠色熒光,轉染72h時,大約80% Hela細胞內均可見綠色熒光.加入含G418的選擇性培養基進行選擇性培養,選擇熒光較彊的Hela細胞經有限稀釋,持續篩選及剋隆化培養,穫得穩定錶達綠色熒光的Hela細胞剋隆,擴大培養併傳至10代以上,將此細胞株命名為Hela-EGFP.激光共聚焦顯微鏡觀察髮現:在藍光 (-395nm)激髮時,Hela-EGFP細胞綠色熒光激髮波長為395nm,最大髮射峰為509nm.結論 Hela-EGFP細胞株具備穩定錶達EGFP的能力,為實時可視化進行宮頸癌侵襲轉移機製的研究奠定瞭基礎.
목적 구건증강형록색형광단백(EGFP)표기적Hela세포계.방법 PCR화DNA측서감정pEGFP-C1진핵표체질립,채용Qiagen tip 500진행pEGFP-C1진핵표체질립DNA적제취화순화;cellfectin전염Hela세포,G418사선,유한희석법단극륭배양,형광현미경진행형광검측EGFP적표체,채용격광공취초현미경관측기검측형광특성.결과 PCR화DNA측서증실pEGFP질립결구정학;재도치형광현미경하,전염24h후,부분Hela세포가견록색형광,전염72h시,대약80% Hela세포내균가견록색형광.가입함G418적선택성배양기진행선택성배양,선택형광교강적Hela세포경유한희석,지속사선급극륭화배양,획득은정표체록색형광적Hela세포극륭,확대배양병전지10대이상,장차세포주명명위Hela-EGFP.격광공취초현미경관찰발현:재람광 (-395nm)격발시,Hela-EGFP세포록색형광격발파장위395nm,최대발사봉위509nm.결론 Hela-EGFP세포주구비은정표체EGFP적능력,위실시가시화진행궁경암침습전이궤제적연구전정료기출.
