医学检验与临床
醫學檢驗與臨床
의학검험여림상
MEDICAL LATORATORY SCIENCE AND CLINICES
2008年
6期
58-61
,共4页
金黄色葡萄球菌%肠毒素B%克隆%原核表达
金黃色葡萄毬菌%腸毒素B%剋隆%原覈錶達
금황색포도구균%장독소B%극륭%원핵표체
目的 构建金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)基因的原核表达克隆,并在大肠杆菌中表达.方法 从金黄色葡萄球菌中提出DNA,PCR扩增出肠毒素B(SEB)成熟肽前体蛋白基因,将其插入到质粒pGEX-4T-2编码谷胱甘肤转移酶(GST)的多克隆位点(MCS),构建原核表达克隆(PGEX-4T-2/SEB).重组质粒经酶切、测序鉴定后转化大肠杆菌,IPTG诱导表达目的 蛋白.SDS-PAGE电泳分析蛋白图谱.Western blot鉴定表达蛋白.结果 经酶切和测序分析,表明成功构建了pGEX-4T-2/SEB原核表达克隆.经IVTG诱导,转化的大肠杆菌表达出相对分子质量(Mr)为55×103Daltons的融合蛋白,且该蛋白能与抗SEB抗体发生特异性结合反应.结论 金黄色葡萄球菌肠毒素B(SES)基因原核表达克隆的成功构建,并在大肠杆菌中高效表达,为进一步研究肠毒素B(SEB)的生物学功能和-临床应用奠定了基础.
目的 構建金黃色葡萄毬菌腸毒素B(SEB)基因的原覈錶達剋隆,併在大腸桿菌中錶達.方法 從金黃色葡萄毬菌中提齣DNA,PCR擴增齣腸毒素B(SEB)成熟肽前體蛋白基因,將其插入到質粒pGEX-4T-2編碼穀胱甘膚轉移酶(GST)的多剋隆位點(MCS),構建原覈錶達剋隆(PGEX-4T-2/SEB).重組質粒經酶切、測序鑒定後轉化大腸桿菌,IPTG誘導錶達目的 蛋白.SDS-PAGE電泳分析蛋白圖譜.Western blot鑒定錶達蛋白.結果 經酶切和測序分析,錶明成功構建瞭pGEX-4T-2/SEB原覈錶達剋隆.經IVTG誘導,轉化的大腸桿菌錶達齣相對分子質量(Mr)為55×103Daltons的融閤蛋白,且該蛋白能與抗SEB抗體髮生特異性結閤反應.結論 金黃色葡萄毬菌腸毒素B(SES)基因原覈錶達剋隆的成功構建,併在大腸桿菌中高效錶達,為進一步研究腸毒素B(SEB)的生物學功能和-臨床應用奠定瞭基礎.
목적 구건금황색포도구균장독소B(SEB)기인적원핵표체극륭,병재대장간균중표체.방법 종금황색포도구균중제출DNA,PCR확증출장독소B(SEB)성숙태전체단백기인,장기삽입도질립pGEX-4T-2편마곡광감부전이매(GST)적다극륭위점(MCS),구건원핵표체극륭(PGEX-4T-2/SEB).중조질립경매절、측서감정후전화대장간균,IPTG유도표체목적 단백.SDS-PAGE전영분석단백도보.Western blot감정표체단백.결과 경매절화측서분석,표명성공구건료pGEX-4T-2/SEB원핵표체극륭.경IVTG유도,전화적대장간균표체출상대분자질량(Mr)위55×103Daltons적융합단백,차해단백능여항SEB항체발생특이성결합반응.결론 금황색포도구균장독소B(SES)기인원핵표체극륭적성공구건,병재대장간균중고효표체,위진일보연구장독소B(SEB)적생물학공능화-림상응용전정료기출.
