CAJ | 학술논문

利用PCR技术从质粒pSHIV89.6P中扩增猴免疫缺陷病毒(SIV)衣壳蛋白p27基因,并将其插入表达载体pET32a(+)构建重组质粒pET32a-p27,转化大肠杆茵BL21,经IPTG诱导,对其产物进行SDS-PAGE和Western blot分析,并将纯化定量后的表达产物免疫小鼠,制备单克隆抗体.结果显示,gag基因的p27相应片段为763 bp,其表达产物相对分子量为46 ku.经镍柱纯化,获得目的蛋白p27纯度可达90%以上.利用淋巴细胞杂交瘤技术获得5株稳定分泌抗p27的单克隆抗体细胞株,分别命名为1A5、1C7、3C2、2D12、3D12.5株杂交瘤细胞诱生小鼠产生的腹水抗体效价分别为1:12 800、1:25 600、1:819 200、1:51 200和1:409 600.免疫球蛋白类型均为IgG1型,轻链均为λ链.Western blot和IFA试验结果表明所获得的单克隆抗体均对病原检测具有很高的特异性,为进一步开发SIV早期诊断试剂盒奠定了基础.
이용PCR기술종질립pSHIV89.6P중확증후면역결함병독(SIV)의각단백p27기인,병장기삽입표체재체pET32a(+)구건중조질립pET32a-p27,전화대장간인BL21,경IPTG유도,대기산물진행SDS-PAGE화Western blot분석,병장순화정량후적표체산물면역소서,제비단극륭항체.결과현시,gag기인적p27상응편단위763 bp,기표체산물상대분자량위46 ku.경얼주순화,획득목적단백p27순도가체90%이상.이용림파세포잡교류기술획득5주은정분비항p27적단극륭항체세포주,분별명명위1A5、1C7、3C2、2D12、3D12.5주잡교류세포유생소서산생적복수항체효개분별위1:12 800、1:25 600、1:819 200、1:51 200화1:409 600.면역구단백류형균위IgG1형,경련균위λ련.Western blot화IFA시험결과표명소획득적단극륭항체균대병원검측구유흔고적특이성,위진일보개발SIV조기진단시제합전정료기출.