中国兽医科学
中國獸醫科學
중국수의과학
VETERINARY SCIENCE IN CHINA
2008年
11期
962-967
,共6页
张祥斌%谢青梅%马静云%曹永长%冀君%李少璃%毕英佐
張祥斌%謝青梅%馬靜雲%曹永長%冀君%李少璃%畢英佐
장상빈%사청매%마정운%조영장%기군%리소리%필영좌
H1N1亚型猪流感病毒%血凝素%高效可溶表达%单克隆抗体
H1N1亞型豬流感病毒%血凝素%高效可溶錶達%單剋隆抗體
H1N1아형저류감병독%혈응소%고효가용표체%단극륭항체
采用RT-PCR方法扩增了H1N1亚型猪流感病毒(SIV)广东株的血凝素(HA)基因,测序后对HA基因进行了生物信息学分析.将HA基因克隆到高效可溶表达载体pBCX上,成功构建重组表达质粒pBCX-HA.将其转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,用IPTG进行诱导表达.诱导表达的HA融合蛋白分子质量约为94.0 ku,表达产物占菌体总蛋白的29.5%.经Western-blot分析证实可溶表达的融合蛋白与H1N1亚型猪流感病毒阳性血清具有良好的免疫反应性.用纯化的HA融合蛋白作包被抗原用于猪流感病毒单克隆抗体的筛选,成功筛选到2株针对HA蛋白抗原表位的单克隆抗体;ELISA结果表明,制备的SIV单克隆抗体ⅢF6A4C10与H1N1亚型SIV抗原具有特异的免疫反应性,为H1N1 SIV的鉴别诊断奠定了基础.
採用RT-PCR方法擴增瞭H1N1亞型豬流感病毒(SIV)廣東株的血凝素(HA)基因,測序後對HA基因進行瞭生物信息學分析.將HA基因剋隆到高效可溶錶達載體pBCX上,成功構建重組錶達質粒pBCX-HA.將其轉化到大腸桿菌BL21(DE3)感受態細胞中,用IPTG進行誘導錶達.誘導錶達的HA融閤蛋白分子質量約為94.0 ku,錶達產物佔菌體總蛋白的29.5%.經Western-blot分析證實可溶錶達的融閤蛋白與H1N1亞型豬流感病毒暘性血清具有良好的免疫反應性.用純化的HA融閤蛋白作包被抗原用于豬流感病毒單剋隆抗體的篩選,成功篩選到2株針對HA蛋白抗原錶位的單剋隆抗體;ELISA結果錶明,製備的SIV單剋隆抗體ⅢF6A4C10與H1N1亞型SIV抗原具有特異的免疫反應性,為H1N1 SIV的鑒彆診斷奠定瞭基礎.
채용RT-PCR방법확증료H1N1아형저류감병독(SIV)엄동주적혈응소(HA)기인,측서후대HA기인진행료생물신식학분석.장HA기인극륭도고효가용표체재체pBCX상,성공구건중조표체질립pBCX-HA.장기전화도대장간균BL21(DE3)감수태세포중,용IPTG진행유도표체.유도표체적HA융합단백분자질량약위94.0 ku,표체산물점균체총단백적29.5%.경Western-blot분석증실가용표체적융합단백여H1N1아형저류감병독양성혈청구유량호적면역반응성.용순화적HA융합단백작포피항원용우저류감병독단극륭항체적사선,성공사선도2주침대HA단백항원표위적단극륭항체;ELISA결과표명,제비적SIV단극륭항체ⅢF6A4C10여H1N1아형SIV항원구유특이적면역반응성,위H1N1 SIV적감별진단전정료기출.
