中国水产科学
中國水產科學
중국수산과학
Journal of Fishery Sciences of China
2008年
5期
880-884
,共5页
谭爱萍%邹为民%赵飞%姜兰%陈信廉%劳海华%简清%陆小萏%罗理
譚愛萍%鄒為民%趙飛%薑蘭%陳信廉%勞海華%簡清%陸小萏%囉理
담애평%추위민%조비%강란%진신렴%로해화%간청%륙소담%라리
锦鲤疱疹病毒%主要囊膜蛋白基因%序列分析%原核表达载体
錦鯉皰疹病毒%主要囊膜蛋白基因%序列分析%原覈錶達載體
금리포진병독%주요낭막단백기인%서렬분석%원핵표체재체
为了进一步研究锦鲤疱疹病毒主要囊膜蛋白(KHV-MEP)的功能及锦鲤疱疹病毒(KHV)的感染机制,根据KHV-MEP基因序列设计并合成1对引物,从自然感染KHV发病的锦鲤(Cyprinus carpio Koi)肝组织总DNA中扩增获得特异性基因片段.将所得基因片段克隆到pMD18-T Simple Vector载体中,获得重组质粒T-KMEP;酶切鉴定后进行序列测定,并采用氨基酸亲水性分析软件Tmpred对其编码氨基酸序列进行分析;在对该片段所编码氨基酸可能抗原位点分析的基础上,进行PCR改造构建原核表达载体,获得重组表达载体pBV-KMEP1和pBV-KMEP2.所获得的基因片段大小为771 bp,该基因片段与GenBank中已登录的KHV-MEP基因(AB178537)的同源性为100%,是一个完整的开放阅读框,所编码的蛋白由256个氨基酸组成,分子量为28.2kD,等电点(PI)为8.65.该序列含有4个跨膜区,可构成主要抗原决定簇.结果显示所获得的目的基因片段就是锦鲤主要囊膜蛋白全基因.
為瞭進一步研究錦鯉皰疹病毒主要囊膜蛋白(KHV-MEP)的功能及錦鯉皰疹病毒(KHV)的感染機製,根據KHV-MEP基因序列設計併閤成1對引物,從自然感染KHV髮病的錦鯉(Cyprinus carpio Koi)肝組織總DNA中擴增穫得特異性基因片段.將所得基因片段剋隆到pMD18-T Simple Vector載體中,穫得重組質粒T-KMEP;酶切鑒定後進行序列測定,併採用氨基痠親水性分析軟件Tmpred對其編碼氨基痠序列進行分析;在對該片段所編碼氨基痠可能抗原位點分析的基礎上,進行PCR改造構建原覈錶達載體,穫得重組錶達載體pBV-KMEP1和pBV-KMEP2.所穫得的基因片段大小為771 bp,該基因片段與GenBank中已登錄的KHV-MEP基因(AB178537)的同源性為100%,是一箇完整的開放閱讀框,所編碼的蛋白由256箇氨基痠組成,分子量為28.2kD,等電點(PI)為8.65.該序列含有4箇跨膜區,可構成主要抗原決定簇.結果顯示所穫得的目的基因片段就是錦鯉主要囊膜蛋白全基因.
위료진일보연구금리포진병독주요낭막단백(KHV-MEP)적공능급금리포진병독(KHV)적감염궤제,근거KHV-MEP기인서렬설계병합성1대인물,종자연감염KHV발병적금리(Cyprinus carpio Koi)간조직총DNA중확증획득특이성기인편단.장소득기인편단극륭도pMD18-T Simple Vector재체중,획득중조질립T-KMEP;매절감정후진행서렬측정,병채용안기산친수성분석연건Tmpred대기편마안기산서렬진행분석;재대해편단소편마안기산가능항원위점분석적기출상,진행PCR개조구건원핵표체재체,획득중조표체재체pBV-KMEP1화pBV-KMEP2.소획득적기인편단대소위771 bp,해기인편단여GenBank중이등록적KHV-MEP기인(AB178537)적동원성위100%,시일개완정적개방열독광,소편마적단백유256개안기산조성,분자량위28.2kD,등전점(PI)위8.65.해서렬함유4개과막구,가구성주요항원결정족.결과현시소획득적목적기인편단취시금리주요낭막단백전기인.
