中国生物制品学杂志
中國生物製品學雜誌
중국생물제품학잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS
2008年
9期
771-773
,共3页
朱卫华%李生迪%宣俊文%陈翠萍
硃衛華%李生迪%宣俊文%陳翠萍
주위화%리생적%선준문%진취평
幽门螺杆菌%尿素酶B亚单位%克隆%原核表达
幽門螺桿菌%尿素酶B亞單位%剋隆%原覈錶達
유문라간균%뇨소매B아단위%극륭%원핵표체
目的 克隆幽门螺杆菌尿素酶B亚单位(UreB)基因,构建原核表达载体,并进行高效表达.方法 以幽门螺杆菌基因组DNA为模板,PCR扩增UreB基因,双酶切后,与质粒pET-22b(+)连接,构建表达载体pET-22b(+)/UreB,分别转化E. coli BL21(DE3)、Origami(DE3)和Rossetta(DE3),经IPTG诱导后,进行SDS-PAGE和Western blot分析.结果 经酶切及测序,证明幽门螺杆菌UreB基因的原核表达载体构建正确.3种重组菌的诱导表达产物经SDS-PAGE分析,均可见相对分子质量为64000的目的 蛋白条带,Rossetta(DE3)重组菌目的 蛋白表达量最高,约占菌体蛋白的35%.Western blot结果表明,表达的目的 蛋白具有良好的反应原性.结论 已成功克隆了幽门螺杆菌UreB基因,并在大肠杆菌Rosssetta(DE3)中获得了高效表达.
目的 剋隆幽門螺桿菌尿素酶B亞單位(UreB)基因,構建原覈錶達載體,併進行高效錶達.方法 以幽門螺桿菌基因組DNA為模闆,PCR擴增UreB基因,雙酶切後,與質粒pET-22b(+)連接,構建錶達載體pET-22b(+)/UreB,分彆轉化E. coli BL21(DE3)、Origami(DE3)和Rossetta(DE3),經IPTG誘導後,進行SDS-PAGE和Western blot分析.結果 經酶切及測序,證明幽門螺桿菌UreB基因的原覈錶達載體構建正確.3種重組菌的誘導錶達產物經SDS-PAGE分析,均可見相對分子質量為64000的目的 蛋白條帶,Rossetta(DE3)重組菌目的 蛋白錶達量最高,約佔菌體蛋白的35%.Western blot結果錶明,錶達的目的 蛋白具有良好的反應原性.結論 已成功剋隆瞭幽門螺桿菌UreB基因,併在大腸桿菌Rosssetta(DE3)中穫得瞭高效錶達.
목적 극륭유문라간균뇨소매B아단위(UreB)기인,구건원핵표체재체,병진행고효표체.방법 이유문라간균기인조DNA위모판,PCR확증UreB기인,쌍매절후,여질립pET-22b(+)련접,구건표체재체pET-22b(+)/UreB,분별전화E. coli BL21(DE3)、Origami(DE3)화Rossetta(DE3),경IPTG유도후,진행SDS-PAGE화Western blot분석.결과 경매절급측서,증명유문라간균UreB기인적원핵표체재체구건정학.3충중조균적유도표체산물경SDS-PAGE분석,균가견상대분자질량위64000적목적 단백조대,Rossetta(DE3)중조균목적 단백표체량최고,약점균체단백적35%.Western blot결과표명,표체적목적 단백구유량호적반응원성.결론 이성공극륭료유문라간균UreB기인,병재대장간균Rosssetta(DE3)중획득료고효표체.
