南京大学学报(自然科学版)
南京大學學報(自然科學版)
남경대학학보(자연과학판)
JOURNAL OF NANJING UNIVERSITY
2001年
4期
407-415
,共9页
陈于红%孙自勇%朱镇华%张菁%傅一工%朱德煦%刘建宁
陳于紅%孫自勇%硃鎮華%張菁%傅一工%硃德煦%劉建寧
진우홍%손자용%주진화%장정%부일공%주덕후%류건저
重组人尿激酶原%发酵%活化%纯化
重組人尿激酶原%髮酵%活化%純化
중조인뇨격매원%발효%활화%순화
将含有pET29a-prouk重组质粒的人尿激酶原工程菌经10 L种子罐培养及100L发酵,IPTG诱导表达,其表达量为占菌体总蛋白的20%,表达产物经体外变复性,CM-纤维素离子交换层析,Superdex 75分子筛层析及Affi-prep polymyxin support亲和层析去热源,每100L发酵液得重组人尿激酶原纯品6 g,纯度达95%以上,比活大于1.2×104IU/mg,双链含量低于0.5%,内毒素及热源含量、宿主蛋白残留量、宿主DNA残留量等均达到临床使用标准.其分子量(质谱测定)、氨基酸组成、N、C-端氨基酸序列分析等均与理论值相符.进行了等电点及肽图等性质研究.
將含有pET29a-prouk重組質粒的人尿激酶原工程菌經10 L種子罐培養及100L髮酵,IPTG誘導錶達,其錶達量為佔菌體總蛋白的20%,錶達產物經體外變複性,CM-纖維素離子交換層析,Superdex 75分子篩層析及Affi-prep polymyxin support親和層析去熱源,每100L髮酵液得重組人尿激酶原純品6 g,純度達95%以上,比活大于1.2×104IU/mg,雙鏈含量低于0.5%,內毒素及熱源含量、宿主蛋白殘留量、宿主DNA殘留量等均達到臨床使用標準.其分子量(質譜測定)、氨基痠組成、N、C-耑氨基痠序列分析等均與理論值相符.進行瞭等電點及肽圖等性質研究.
장함유pET29a-prouk중조질립적인뇨격매원공정균경10 L충자관배양급100L발효,IPTG유도표체,기표체량위점균체총단백적20%,표체산물경체외변복성,CM-섬유소리자교환층석,Superdex 75분자사층석급Affi-prep polymyxin support친화층석거열원,매100L발효액득중조인뇨격매원순품6 g,순도체95%이상,비활대우1.2×104IU/mg,쌍련함량저우0.5%,내독소급열원함량、숙주단백잔류량、숙주DNA잔류량등균체도림상사용표준.기분자량(질보측정)、안기산조성、N、C-단안기산서렬분석등균여이론치상부.진행료등전점급태도등성질연구.
