生物医学工程与临床
生物醫學工程與臨床
생물의학공정여림상
BIOMEDICAL ENGINEERING AND CLINICAL MEDICINE
2008年
3期
240-244
,共5页
贺欣%赵启仁%宋娜玲%颜廷东
賀訢%趙啟仁%宋娜玲%顏廷東
하흔%조계인%송나령%안정동
肿瘤抑素T7肽%T7-NGR%导向肽%基因克隆表达
腫瘤抑素T7肽%T7-NGR%導嚮肽%基因剋隆錶達
종류억소T7태%T7-NGR%도향태%기인극륭표체
目的 为了提高作用靶向性,将导向肽NGR与肿瘤抑素T7肽的C端连接,获得T7肽及其衍生物T2-NGR的载体.方法 通过PCR和合成基因序列方法分别构建了肿瘤抑素T7肽及T7-NGR的克隆载体pMD-T7和pMD-T7N,经酶切和测序鉴定后,将2种载体分别双酶切,经低熔点琼脂糖凝胶电泳分离后,切下目的 片段与酶切回收的质粒载体pET28a在低熔点琼脂糖中直接进行连接反应.阳性克隆经酶切和测序鉴定,转化感受态E.coli BL21(DE3),IFTG诱导表达.结果 酶切和测序鉴定结果正确,分别成功构建表达载体pET-T7和pET-T7N,经IPTG诱导,完成了表达条件的优化.Tricihe-SDS-PAGE凝胶电泳结果显示,当IPTG浓度为1 mmol/L时,25℃诱导8 h,分别获得了T7肽和T7-NGR的表达产物.结论 已经成功构建T7肽和T7-NGR的表达载体,获得了表达产物,为下一步的小肽活性实验奠定了基础.
目的 為瞭提高作用靶嚮性,將導嚮肽NGR與腫瘤抑素T7肽的C耑連接,穫得T7肽及其衍生物T2-NGR的載體.方法 通過PCR和閤成基因序列方法分彆構建瞭腫瘤抑素T7肽及T7-NGR的剋隆載體pMD-T7和pMD-T7N,經酶切和測序鑒定後,將2種載體分彆雙酶切,經低鎔點瓊脂糖凝膠電泳分離後,切下目的 片段與酶切迴收的質粒載體pET28a在低鎔點瓊脂糖中直接進行連接反應.暘性剋隆經酶切和測序鑒定,轉化感受態E.coli BL21(DE3),IFTG誘導錶達.結果 酶切和測序鑒定結果正確,分彆成功構建錶達載體pET-T7和pET-T7N,經IPTG誘導,完成瞭錶達條件的優化.Tricihe-SDS-PAGE凝膠電泳結果顯示,噹IPTG濃度為1 mmol/L時,25℃誘導8 h,分彆穫得瞭T7肽和T7-NGR的錶達產物.結論 已經成功構建T7肽和T7-NGR的錶達載體,穫得瞭錶達產物,為下一步的小肽活性實驗奠定瞭基礎.
목적 위료제고작용파향성,장도향태NGR여종류억소T7태적C단련접,획득T7태급기연생물T2-NGR적재체.방법 통과PCR화합성기인서렬방법분별구건료종류억소T7태급T7-NGR적극륭재체pMD-T7화pMD-T7N,경매절화측서감정후,장2충재체분별쌍매절,경저용점경지당응효전영분리후,절하목적 편단여매절회수적질립재체pET28a재저용점경지당중직접진행련접반응.양성극륭경매절화측서감정,전화감수태E.coli BL21(DE3),IFTG유도표체.결과 매절화측서감정결과정학,분별성공구건표체재체pET-T7화pET-T7N,경IPTG유도,완성료표체조건적우화.Tricihe-SDS-PAGE응효전영결과현시,당IPTG농도위1 mmol/L시,25℃유도8 h,분별획득료T7태화T7-NGR적표체산물.결론 이경성공구건T7태화T7-NGR적표체재체,획득료표체산물,위하일보적소태활성실험전정료기출.
