江苏医药
江囌醫藥
강소의약
JIANGSU MEDICAL JOURNAL
2008年
5期
493-496
,共4页
金月玲%商延芳%田小强%方媛%黄培林
金月玲%商延芳%田小彊%方媛%黃培林
금월령%상연방%전소강%방원%황배림
核糖核酸干扰%DLC-1基因%LoVo细胞株%结直肠癌
覈糖覈痠榦擾%DLC-1基因%LoVo細胞株%結直腸癌
핵당핵산간우%DLC-1기인%LoVo세포주%결직장암
目的 应用核糖核酸干扰(RNAi)技术,通过对大肠癌细胞株LoVo中DLC-1基因mRNA表达的抑制,初步探讨DLC-1基因对大肠癌细胞株的生物学行为影响.方法 构建DCL-1的RNAi重组体pGCsiDLC,转染大肠癌LoVo细胞株.采用RT-PCR观察转染前后细胞株中DLC-1 mRNA以及 Bax、Bcl-2基因表达的改变,MTT比色法检测转染前后细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期.结果 成功构建发卡siRNA真核表达载体pGCsiDLC;pGCsiDLC转染LoVo细胞后,电泳显示DLC-1 mRNA表达水平明显下降;LoVo细胞生长曲线增长幅度亦随时间的增加而逐渐增高,在48h最为明显,RNAi组细胞比脂质体组及空白对照组细胞增殖明显增高(P＜0.05);干扰后的LoVo细胞株G0/G1期发生阻滞,而G2/M 期细胞数量分布减少.而Bax和bcl-2基因表达在干扰前后未见明显改变.结论 成功构建载体介导的DLC-1靶向RNAi重组体可有效抑制LoVo细胞DLC-1 mRNA表达;DLC-1基因可抑制结直肠癌细胞增殖并且对细胞周期重新分布,其可能与结直肠癌的发生发展有一定关系,可能是一个新的抑癌基因.
目的 應用覈糖覈痠榦擾(RNAi)技術,通過對大腸癌細胞株LoVo中DLC-1基因mRNA錶達的抑製,初步探討DLC-1基因對大腸癌細胞株的生物學行為影響.方法 構建DCL-1的RNAi重組體pGCsiDLC,轉染大腸癌LoVo細胞株.採用RT-PCR觀察轉染前後細胞株中DLC-1 mRNA以及 Bax、Bcl-2基因錶達的改變,MTT比色法檢測轉染前後細胞增殖,流式細胞儀檢測細胞週期.結果 成功構建髮卡siRNA真覈錶達載體pGCsiDLC;pGCsiDLC轉染LoVo細胞後,電泳顯示DLC-1 mRNA錶達水平明顯下降;LoVo細胞生長麯線增長幅度亦隨時間的增加而逐漸增高,在48h最為明顯,RNAi組細胞比脂質體組及空白對照組細胞增殖明顯增高(P＜0.05);榦擾後的LoVo細胞株G0/G1期髮生阻滯,而G2/M 期細胞數量分佈減少.而Bax和bcl-2基因錶達在榦擾前後未見明顯改變.結論 成功構建載體介導的DLC-1靶嚮RNAi重組體可有效抑製LoVo細胞DLC-1 mRNA錶達;DLC-1基因可抑製結直腸癌細胞增殖併且對細胞週期重新分佈,其可能與結直腸癌的髮生髮展有一定關繫,可能是一箇新的抑癌基因.
목적 응용핵당핵산간우(RNAi)기술,통과대대장암세포주LoVo중DLC-1기인mRNA표체적억제,초보탐토DLC-1기인대대장암세포주적생물학행위영향.방법 구건DCL-1적RNAi중조체pGCsiDLC,전염대장암LoVo세포주.채용RT-PCR관찰전염전후세포주중DLC-1 mRNA이급 Bax、Bcl-2기인표체적개변,MTT비색법검측전염전후세포증식,류식세포의검측세포주기.결과 성공구건발잡siRNA진핵표체재체pGCsiDLC;pGCsiDLC전염LoVo세포후,전영현시DLC-1 mRNA표체수평명현하강;LoVo세포생장곡선증장폭도역수시간적증가이축점증고,재48h최위명현,RNAi조세포비지질체조급공백대조조세포증식명현증고(P＜0.05);간우후적LoVo세포주G0/G1기발생조체,이G2/M 기세포수량분포감소.이Bax화bcl-2기인표체재간우전후미견명현개변.결론 성공구건재체개도적DLC-1파향RNAi중조체가유효억제LoVo세포DLC-1 mRNA표체;DLC-1기인가억제결직장암세포증식병차대세포주기중신분포,기가능여결직장암적발생발전유일정관계,가능시일개신적억암기인.
