细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2008年
1期
27-29
,共3页
赵艳%段素素%车昌艳%张蕾%张云%王树蕙%刘力
趙豔%段素素%車昌豔%張蕾%張雲%王樹蕙%劉力
조염%단소소%차창염%장뢰%장운%왕수혜%류력
人细胞因子受体样因子3%真核表达%原核表达%蛋白纯化
人細胞因子受體樣因子3%真覈錶達%原覈錶達%蛋白純化
인세포인자수체양인자3%진핵표체%원핵표체%단백순화
目的:观察CRLF3蛋白在293T细胞中的表达及亚细胞定位,并在大肠杆菌中表达和纯化了重组CRLF3蛋白.方法:将真核表达载体pCMV-myc-CRLF3瞬时转染293T细胞,转染24 h和48 h后免疫荧光染色,共聚焦显微镜观察蛋白表达及定位;构建原核表达质粒pGEX-4T-1-CRLF3,实现插入基因的融合表达,经GST亲合层析纯化蛋白.结果:CRLF3蛋白在293T细胞中高效表达,主要分布在细胞质和细胞膜;成功构建了表达CRLF3融合蛋白的原核表达载体,并在大肠杆菌内高效表达,纯化后得到Mr约为74 000的融合蛋白.结论:在真核细胞中过表达的CRLF3蛋白主要定位在细胞质和细胞膜;获得了重组GST-CRLF3融合蛋白,为进一步探讨CRLF3的功能奠定基础.
目的:觀察CRLF3蛋白在293T細胞中的錶達及亞細胞定位,併在大腸桿菌中錶達和純化瞭重組CRLF3蛋白.方法:將真覈錶達載體pCMV-myc-CRLF3瞬時轉染293T細胞,轉染24 h和48 h後免疫熒光染色,共聚焦顯微鏡觀察蛋白錶達及定位;構建原覈錶達質粒pGEX-4T-1-CRLF3,實現插入基因的融閤錶達,經GST親閤層析純化蛋白.結果:CRLF3蛋白在293T細胞中高效錶達,主要分佈在細胞質和細胞膜;成功構建瞭錶達CRLF3融閤蛋白的原覈錶達載體,併在大腸桿菌內高效錶達,純化後得到Mr約為74 000的融閤蛋白.結論:在真覈細胞中過錶達的CRLF3蛋白主要定位在細胞質和細胞膜;穫得瞭重組GST-CRLF3融閤蛋白,為進一步探討CRLF3的功能奠定基礎.
목적:관찰CRLF3단백재293T세포중적표체급아세포정위,병재대장간균중표체화순화료중조CRLF3단백.방법:장진핵표체재체pCMV-myc-CRLF3순시전염293T세포,전염24 h화48 h후면역형광염색,공취초현미경관찰단백표체급정위;구건원핵표체질립pGEX-4T-1-CRLF3,실현삽입기인적융합표체,경GST친합층석순화단백.결과:CRLF3단백재293T세포중고효표체,주요분포재세포질화세포막;성공구건료표체CRLF3융합단백적원핵표체재체,병재대장간균내고효표체,순화후득도Mr약위74 000적융합단백.결론:재진핵세포중과표체적CRLF3단백주요정위재세포질화세포막;획득료중조GST-CRLF3융합단백,위진일보탐토CRLF3적공능전정기출.
