CAJ | 학술논문

对獭兔RAPD体系中Taq DNA聚合酶浓度、引物浓度、基因组DNA浓度进行研究.结果表明:Taq酶浓度为1.0 U,引物浓度为10 pmol/μl,基因组DNA浓度为50 ng/μl时,可获得清晰、稳定性好的条带.优化的RAPD反应体系为:总体积为20.0 μl.10×Buffer(含Mg2+)为2.0μl;dNTPs(各2.5 mmol/L)为2.0 μl;Taq酶浓度为1.0 U,引物浓度为10 pmol/μl,基因组DNA浓度为50 ng/μl;超纯水为13.8 μl.PCR扩增条件为:97℃预变性7 min,94 ℃1 min,36 ℃退火1 min,72 ℃2 min,45个循环后,在72 ℃延伸10 min结束,4 ℃保存.PCR扩增产物通过1.4%的琼脂糖凝胶电泳检测.点样后,以2～3 V/cm电压降稳压电泳3.0～3.5 h.
대달토RAPD체계중Taq DNA취합매농도、인물농도、기인조DNA농도진행연구.결과표명:Taq매농도위1.0 U,인물농도위10 pmol/μl,기인조DNA농도위50 ng/μl시,가획득청석、은정성호적조대.우화적RAPD반응체계위:총체적위20.0 μl.10×Buffer(함Mg2+)위2.0μl;dNTPs(각2.5 mmol/L)위2.0 μl;Taq매농도위1.0 U,인물농도위10 pmol/μl,기인조DNA농도위50 ng/μl;초순수위13.8 μl.PCR확증조건위:97℃예변성7 min,94 ℃1 min,36 ℃퇴화1 min,72 ℃2 min,45개순배후,재72 ℃연신10 min결속,4 ℃보존.PCR확증산물통과1.4%적경지당응효전영검측.점양후,이2～3 V/cm전압강은압전영3.0～3.5 h.