肿瘤防治研究
腫瘤防治研究
종류방치연구
CANCER RESEARCH ON PREVENTION AND TREATMENT
2007年
9期
667-670,738
,共5页
曾赵军%李子博%胡维新%罗赛群%陈迁
曾趙軍%李子博%鬍維新%囉賽群%陳遷
증조군%리자박%호유신%라새군%진천
腺相关病毒%Tet-On基因%HSVtk基因%乳腺肿瘤%基因治疗
腺相關病毒%Tet-On基因%HSVtk基因%乳腺腫瘤%基因治療
선상관병독%Tet-On기인%HSVtk기인%유선종류%기인치료
目的 探讨Tet调控下自杀基因HSVtk重组腺相关病毒载体(rAAV/HSVtk/Tet-On) 对人乳腺癌细胞株(MCF-7)的作用.方法 将HSVtk和Tet-On基因分别定向克隆入腺相关病毒质粒pAAV MCS中, 构建重组腺相关病毒载体pAAV/TRE/HSVtk/Tet-On,与辅助质粒pAAV-RC、pHelper和包装细胞293进行包装、纯化.用β半乳糖苷酶原位染色法检测报告基因rAAV/LacZ在MCF-7中的表达,计算其基因转染效率.采用斑点杂交、RT-PCR检测MCF-7细胞基因组中HSVtk基因整合、病毒滴度及其表达. 结果 rAAV/HSVtk/Tet-On病毒滴度为2.38×1011 particle/ml, LacZ基因在感染的MCF-7中能持续表达,感染效率为20% ～30%.纯化后的重组腺相关病毒感染MCF-7后,能将目的基因转移到靶细胞中,并在Dox诱导下,使GCV对rAAV感染的MCF-7细胞具有明显的杀伤作用. 结论 HSVtk/Tet-On自杀基因调控系统可通过重组腺相关病毒载体成功转染人乳腺癌细胞株MCF-7, 使其HSVtk mRNA表达增加, 在Dox诱导下,GCV对rAAV(≥104v.p/cell)感染的MCF-7细胞具有明显的杀伤作用.
目的 探討Tet調控下自殺基因HSVtk重組腺相關病毒載體(rAAV/HSVtk/Tet-On) 對人乳腺癌細胞株(MCF-7)的作用.方法 將HSVtk和Tet-On基因分彆定嚮剋隆入腺相關病毒質粒pAAV MCS中, 構建重組腺相關病毒載體pAAV/TRE/HSVtk/Tet-On,與輔助質粒pAAV-RC、pHelper和包裝細胞293進行包裝、純化.用β半乳糖苷酶原位染色法檢測報告基因rAAV/LacZ在MCF-7中的錶達,計算其基因轉染效率.採用斑點雜交、RT-PCR檢測MCF-7細胞基因組中HSVtk基因整閤、病毒滴度及其錶達. 結果 rAAV/HSVtk/Tet-On病毒滴度為2.38×1011 particle/ml, LacZ基因在感染的MCF-7中能持續錶達,感染效率為20% ～30%.純化後的重組腺相關病毒感染MCF-7後,能將目的基因轉移到靶細胞中,併在Dox誘導下,使GCV對rAAV感染的MCF-7細胞具有明顯的殺傷作用. 結論 HSVtk/Tet-On自殺基因調控繫統可通過重組腺相關病毒載體成功轉染人乳腺癌細胞株MCF-7, 使其HSVtk mRNA錶達增加, 在Dox誘導下,GCV對rAAV(≥104v.p/cell)感染的MCF-7細胞具有明顯的殺傷作用.
목적 탐토Tet조공하자살기인HSVtk중조선상관병독재체(rAAV/HSVtk/Tet-On) 대인유선암세포주(MCF-7)적작용.방법 장HSVtk화Tet-On기인분별정향극륭입선상관병독질립pAAV MCS중, 구건중조선상관병독재체pAAV/TRE/HSVtk/Tet-On,여보조질립pAAV-RC、pHelper화포장세포293진행포장、순화.용β반유당감매원위염색법검측보고기인rAAV/LacZ재MCF-7중적표체,계산기기인전염효솔.채용반점잡교、RT-PCR검측MCF-7세포기인조중HSVtk기인정합、병독적도급기표체. 결과 rAAV/HSVtk/Tet-On병독적도위2.38×1011 particle/ml, LacZ기인재감염적MCF-7중능지속표체,감염효솔위20% ～30%.순화후적중조선상관병독감염MCF-7후,능장목적기인전이도파세포중,병재Dox유도하,사GCV대rAAV감염적MCF-7세포구유명현적살상작용. 결론 HSVtk/Tet-On자살기인조공계통가통과중조선상관병독재체성공전염인유선암세포주MCF-7, 사기HSVtk mRNA표체증가, 재Dox유도하,GCV대rAAV(≥104v.p/cell)감염적MCF-7세포구유명현적살상작용.
