CAJ | 학술논문

目的:分离、克隆和测定中国人纤溶酶原Kringle5功能区基因,为进一步研究其功能奠定基础.方法:实验于2002-06/2003-05在广州医学院金域医学检验中心完成.①实验材料:国人胚肝组织取自广州医学院第一附属医院的流产胚胎(取得家属同意,并经广州医学院第一附属医院伦理委员会批准).pET21a(+)载体购自Novagen公司,大肠杆菌BL21(DE3)为医学检验中心保存.引物均由上海生工合成.②实验方法:从国人胚肝组织中提取mRNA,用反转录-聚合酶链反应方法将人纤溶酶原Kringle5的cDNA扩增出来,克隆到pET21a(+)载体中测序.③实验评估:采用紫外分光光度仪和琼脂糖凝胶电泳分析胚肝组织总RNA的抽提结果;经琼脂糖凝胶电泳鉴定Kringle5的反转录-聚合酶链反应扩增结果;pET-Kringle5重组质粒的酶切鉴定;序列测定.结果:①胚肝组织提取总RNA结果:提取的总RNA经紫外分光光度仪测得A260nm/A280nm＞1.8,A260nm/A270nm＞1.2,表明无蛋白残留;电泳结果显示提取的总RNA有明显的28 S、18 S两条带,说明RNA基本完整.②Kringle5的反转录-聚合酶链反应扩增结果:人Kringle5 cDNA片段长为240 bp,加上引物设计的2个酶切位点,总长度为258 bp,聚合酶链反应产物长度与该长度一致,符合预期结果.③pET-Kringle5重组质粒的构建和酶切鉴定结果:用引物所带的限制性内切酶BamH I、Nde I双酶切,结果有250 bp左右条带出现.④序列测定结果:证实国人纤溶酶原Kringle5功能区基因被成功克隆,序列分析证实为该基因,未发现有基因突变或多态性现象,但第153位核苷酸与文献比较存在碱基替代现象,其组成的密码子由于遗传的简并性,所编码的氨基酸相同,并未造成氨基酸组成的改变.结论:中国人纤溶酶原Kringle5功能区cDNA基因编码序列与国外文献报道的相应序列可能存在碱基替代现象.
목적:분리、극륭화측정중국인섬용매원Kringle5공능구기인,위진일보연구기공능전정기출.방법:실험우2002-06/2003-05재엄주의학원금역의학검험중심완성.①실험재료:국인배간조직취자엄주의학원제일부속의원적유산배태(취득가속동의,병경엄주의학원제일부속의원윤리위원회비준).pET21a(+)재체구자Novagen공사,대장간균BL21(DE3)위의학검험중심보존.인물균유상해생공합성.②실험방법:종국인배간조직중제취mRNA,용반전록-취합매련반응방법장인섬용매원Kringle5적cDNA확증출래,극륭도pET21a(+)재체중측서.③실험평고:채용자외분광광도의화경지당응효전영분석배간조직총RNA적추제결과;경경지당응효전영감정Kringle5적반전록-취합매련반응확증결과;pET-Kringle5중조질립적매절감정;서렬측정.결과:①배간조직제취총RNA결과:제취적총RNA경자외분광광도의측득A260nm/A280nm＞1.8,A260nm/A270nm＞1.2,표명무단백잔류;전영결과현시제취적총RNA유명현적28 S、18 S량조대,설명RNA기본완정.②Kringle5적반전록-취합매련반응확증결과:인Kringle5 cDNA편단장위240 bp,가상인물설계적2개매절위점,총장도위258 bp,취합매련반응산물장도여해장도일치,부합예기결과.③pET-Kringle5중조질립적구건화매절감정결과:용인물소대적한제성내절매BamH I、Nde I쌍매절,결과유250 bp좌우조대출현.④서렬측정결과:증실국인섬용매원Kringle5공능구기인피성공극륭,서렬분석증실위해기인,미발현유기인돌변혹다태성현상,단제153위핵감산여문헌비교존재감기체대현상,기조성적밀마자유우유전적간병성,소편마적안기산상동,병미조성안기산조성적개변.결론:중국인섬용매원Kringle5공능구cDNA기인편마서렬여국외문헌보도적상응서렬가능존재감기체대현상.