安徽农业科学
安徽農業科學
안휘농업과학
JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL SCIENCES
2007年
27期
8443-8443,8446
,共2页
原核表达载体%pSBET-His%构建
原覈錶達載體%pSBET-His%構建
원핵표체재체%pSBET-His%구건
为了构建原核表达载体psBET-His.pSBETa质粒经Xba I和BamH I限制性内切酶双酶切,获得原核表达载体的骨架.以pET28a(+)为模板,通过高保真PCR法应用T7 promoter引物和T7 terminator引物对pET28a(+)载体T7表达区域进行扩增,PVR产物电泳纯化后经双酶切和纯化获得138 bp含His-Tag序列的片段.将pSBET原核表达载体骨架和含有His-Tag序列的片段进行连接后转入DH5α感受态细胞中,经菌落PCR及酶切筛选构建pSBET-His.成功构建了pSBET-His原核表达载体.应用该载体表达的蛋白质,可采用镍离子亲和层析法进行纯化.该研究为应用psBET-His载体进行烟草丛顶病毒OBF4的原核表达研究奠定了基础.
為瞭構建原覈錶達載體psBET-His.pSBETa質粒經Xba I和BamH I限製性內切酶雙酶切,穫得原覈錶達載體的骨架.以pET28a(+)為模闆,通過高保真PCR法應用T7 promoter引物和T7 terminator引物對pET28a(+)載體T7錶達區域進行擴增,PVR產物電泳純化後經雙酶切和純化穫得138 bp含His-Tag序列的片段.將pSBET原覈錶達載體骨架和含有His-Tag序列的片段進行連接後轉入DH5α感受態細胞中,經菌落PCR及酶切篩選構建pSBET-His.成功構建瞭pSBET-His原覈錶達載體.應用該載體錶達的蛋白質,可採用鎳離子親和層析法進行純化.該研究為應用psBET-His載體進行煙草叢頂病毒OBF4的原覈錶達研究奠定瞭基礎.
위료구건원핵표체재체psBET-His.pSBETa질립경Xba I화BamH I한제성내절매쌍매절,획득원핵표체재체적골가.이pET28a(+)위모판,통과고보진PCR법응용T7 promoter인물화T7 terminator인물대pET28a(+)재체T7표체구역진행확증,PVR산물전영순화후경쌍매절화순화획득138 bp함His-Tag서렬적편단.장pSBET원핵표체재체골가화함유His-Tag서렬적편단진행련접후전입DH5α감수태세포중,경균락PCR급매절사선구건pSBET-His.성공구건료pSBET-His원핵표체재체.응용해재체표체적단백질,가채용얼리자친화층석법진행순화.해연구위응용psBET-His재체진행연초총정병독OBF4적원핵표체연구전정료기출.
