航天医学与医学工程
航天醫學與醫學工程
항천의학여의학공정
SPACE MEDICINE & MEDICAL ENGINEERING
2007年
4期
250-253
,共4页
高梅%赵京卉%冀治鸿%刘延友%肖静%汪宇辉%王正荣
高梅%趙京卉%冀治鴻%劉延友%肖靜%汪宇輝%王正榮
고매%조경훼%기치홍%류연우%초정%왕우휘%왕정영
hClock-(35-47)%纯化%内皮细胞%穿膜功能
hClock-(35-47)%純化%內皮細胞%穿膜功能
hClock-(35-47)%순화%내피세포%천막공능
目的 构建hClock-(35-47)的表达质粒,进行诱导表达,纯化,在体外初步鉴定其跨膜功能.方法 合成hClock-(35-47)全长DNA序列,重组入pET-32a表达载体中,测序鉴定后转化入大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株,构建好重组体的表达菌株.IPTG诱导并优化表达后,以NTA-Ni亲合层析进行分离纯化,及SDS-PAGE和Western bloting鉴定.纯化鉴定后的hClock-(35-47)用FITC标记,以一定的浓度孵育体外培养的血管内皮细胞(ECV-304),荧光显微镜下观察其穿膜活性.结果 成功构建了hClock-(35-47)的表达载体,插入片断为51 bp,表达产物相对分子质量约为21 kD,经Western bloting 鉴定,与抗His-Tag抗体有特异性反应, 与培养的ECV-304孵化,显示具有穿膜功能.结论 原核表达的hClock-(35-47)仍然保留其穿膜功能,为进一步研究提供基础.
目的 構建hClock-(35-47)的錶達質粒,進行誘導錶達,純化,在體外初步鑒定其跨膜功能.方法 閤成hClock-(35-47)全長DNA序列,重組入pET-32a錶達載體中,測序鑒定後轉化入大腸桿菌Rosetta(DE3)菌株,構建好重組體的錶達菌株.IPTG誘導併優化錶達後,以NTA-Ni親閤層析進行分離純化,及SDS-PAGE和Western bloting鑒定.純化鑒定後的hClock-(35-47)用FITC標記,以一定的濃度孵育體外培養的血管內皮細胞(ECV-304),熒光顯微鏡下觀察其穿膜活性.結果 成功構建瞭hClock-(35-47)的錶達載體,插入片斷為51 bp,錶達產物相對分子質量約為21 kD,經Western bloting 鑒定,與抗His-Tag抗體有特異性反應, 與培養的ECV-304孵化,顯示具有穿膜功能.結論 原覈錶達的hClock-(35-47)仍然保留其穿膜功能,為進一步研究提供基礎.
목적 구건hClock-(35-47)적표체질립,진행유도표체,순화,재체외초보감정기과막공능.방법 합성hClock-(35-47)전장DNA서렬,중조입pET-32a표체재체중,측서감정후전화입대장간균Rosetta(DE3)균주,구건호중조체적표체균주.IPTG유도병우화표체후,이NTA-Ni친합층석진행분리순화,급SDS-PAGE화Western bloting감정.순화감정후적hClock-(35-47)용FITC표기,이일정적농도부육체외배양적혈관내피세포(ECV-304),형광현미경하관찰기천막활성.결과 성공구건료hClock-(35-47)적표체재체,삽입편단위51 bp,표체산물상대분자질량약위21 kD,경Western bloting 감정,여항His-Tag항체유특이성반응, 여배양적ECV-304부화,현시구유천막공능.결론 원핵표체적hClock-(35-47)잉연보류기천막공능,위진일보연구제공기출.
